Идентификация новых молекулярных мишеней для пациентов с ревматоидным артритом

Общая цель - изучить механизмы диссоциации между воспалительной активностью и деструкцией суставов у больных ревматоидным артритом (РА) в стадии ремиссии, но с прогрессированием костных эрозий.

Основная цель состоит в том, чтобы выявить различия между пациентами с АР в стадии клинической ремиссии, но с прогрессирующей суставной эрозией, и пациентами в полной клинической и рентгенологической ремиссии путем характеристики белков, особенно хромогранина А (ХГА), присутствующих как на суставном, так и на системном уровнях.

Вторичные цели: охарактеризовать клеточный воспалительный внутрисуставной инфильтрат и клетки иммунной системы, присутствующие в кровотоке; охарактеризовать белковый профиль клеток, находящихся в синовиальной оболочке, хряще и кости поврежденного сустава. Предполагается, что с помощью этого подхода можно обнаружить белковые или клеточные маркеры, способные на ранней стадии идентифицировать пациентов с риском прогрессирования суставной эрозии, а также идентифицировать специфические клеточные и белковые мишени для разработки местных или системных методов лечения, подходящих для контроля суставной эрозии. эрозивный РА.

Это обсервационное с дополнительной процедурой, судебное, проспективное исследование. 160 больных 80 больных РА (1-я группа), из них:

• Группа 1А: не менее 10 пациентов, максимум 70, с РА в стадии ремиссии, но с прогрессирующей эрозией кости, которым необходимо хирургическое вмешательство.
• Группа 1В: не менее 10 больных, не более 70, с РА в стадии ремиссии, без костной эрозии. Группа 80 контрольная,
• Группа 2: 10 пациентов с остеоартрозом (ОА), которым необходимо хирургическое вмешательство.
• Группа 3:70 без РА и ОА, но госпитализированы по поводу любой другой ортопедической патологии, которым необходимо хирургическое вмешательство.

Поскольку несколько практических вопросов (например, может произойти непригодность или малое количество биологического материала), мы предусматриваем возможность набора дополнительных пациентов до получения полных образцов для описанных групп.

Будут включены мужчины и женщины, пациенты с РА в клинической ремиссии или без нее, пациенты с остеоартритом и пациенты, госпитализированные по поводу любой другой ортопедической патологии (используемые в качестве контроля). Для больных РА будет фиксироваться фармакологическое лечение, лабораторные данные, активность РА, оценка костных эрозий с помощью рентгенографии кистей и стоп.

У пациентов с РА с костной эрозией, пациентов с ОА и контрольной группы будет взята цельная кровь; у пациентов с РА без костной эрозии будет собрана цельная кровь. Из цельной крови будут выделены мононуклеарные клетки и собрана плазма. Еще одна пробирка будет собрана для получения сыворотки для дозировки CHGA. У пациентов с РА и ОА будет собираться синовиальная жидкость вместе с мононуклеарными клетками, присутствующими в этой жидкости, а у пациентов с РА и ОА, кандидатами на тотальное эндопротезирование суставов, фрагменты синовиальной оболочки, хряща, кости и костного мозга будут собираться во время операции в качестве отходов. .

Ядерные клетки, выделенные из цельной крови, синовиальной жидкости и костного мозга, будут охарактеризованы с использованием панели маркеров, указанных в Проекте иммунологии человека.

Массивы белков на образцах плазмы, полученных от пациентов с РА, ОА и контрольной группы, будут выполняться для идентификации панели белков острой фазы, цитокинов и хемокинов, присутствующих на системных уровнях, и для выявления аналогий и различий в системном белковом профиле.

Синовиальная жидкость будет использоваться для идентификации белков, присутствующих в синовиальной жидкости пациентов с РА и ОА. Основные выявленные мишени будут количественно определены и использованы в качестве маркеров прогрессирования эрозии, для разработки внутрисуставной фармакологической терапии и предложения терапевтических доз препаратов. Такой же анализ будет проводиться даже на тканях, полученных от хирургических больных (пациентов с РА и ОА), чтобы установить задействованные пути и специфические тканеспецифические мишени для стимуляции, то есть с помощью трофических факторов, для стимулирования тканевого гомеостаза после выключения аутоиммунные и воспалительные процессы.

Для достижения этой цели охарактеризованные профили белков будут функционально оценены с использованием методов системной биологии, основанных на изучении сетей взаимодействия белок-белок (PPI) (8). Кроме того, профили белка будут обрабатываться с использованием статистики (Пирсон, Спирмен), способной оценить зависимость между переменными и позволить построить сети совместной экспрессии белков (9). В обоих случаях, PPI и/или сети коэкспрессии, изучение структуры сетей позволит идентифицировать узлы, узкие места и модули (10), типичные для пациентов с РА с эрозией или без нее.

Сыворотка будет отправлена ​​в IRCCS Ospedale San Raffaele для количественного определения хромогранина А. Часть клеток, полученных из цельной крови и синовиальной жидкости, будет отправлена ​​в IRCCS педиатрическую клинику Bambino Gesù (Рим, Италия) для дальнейшего иммунологического анализа.