Identificación de nuevos objetivos moleculares para pacientes con artritis reumatoide

El objetivo general es estudiar los mecanismos de disociación entre la actividad inflamatoria y la destrucción articular en pacientes con artritis reumatoide (AR) en remisión pero que presentan una progresión de las erosiones óseas.

El objetivo principal es detectar diferencias entre pacientes con RA en remisión clínica, pero que presentan erosión articular progresiva y pacientes en remisión clínica y radiológica completa, mediante la caracterización de las proteínas, en particular la cromogranina A (CHGA), presentes tanto a nivel articular como sistémico.

Los objetivos secundarios son: caracterizar el infiltrado intraarticular inflamatorio celular y las células del sistema inmune presentes en la circulación; caracterizar el perfil proteico de las células residentes en el sinovio, cartílago y hueso de la articulación lesionada. Se plantea la hipótesis de que con este enfoque es posible detectar proteínas o marcadores celulares capaces de identificar precozmente a los pacientes con riesgo de progresar hacia la erosión articular e identificar dianas celulares y proteicas específicas para el desarrollo de terapias locales o sistémicas adecuadas para el control de la AR erosiva.

Se trata de un estudio observacional con procedimiento adicional, de corte, prospectivo. 160 pacientes 80 pacientes con AR (Grupo 1) de los cuales:

• Grupo 1A: mínimo 10 pacientes, máximo 70, con AR en remisión, pero que presentan erosión ósea progresiva que deben ser intervenidos quirúrgicamente.
• Grupo 1B: al menos 10 pacientes máximo 70, con AR en remisión, sin erosión ósea Un grupo de 80 controles,
• Grupo 2: 10 pacientes con artrosis (OA) que deben someterse a un procedimiento quirúrgico.
• Grupo 3: 70 sin AR y OA pero hospitalizados por cualquier otra patología ortopédica que deban ser intervenidos quirúrgicamente.

Dado que varias cuestiones prácticas (p. inadecuación o baja cantidad de material biológico), se visualiza la posibilidad de reclutar pacientes adicionales hasta lograr muestras completas para los grupos descritos.

Se incluirán pacientes de ambos sexos con AR en remisión clínica o no, pacientes con artrosis y pacientes hospitalizados por cualquier otra patología ortopédica (utilizados como controles). Para los pacientes con AR, se registrará el tratamiento farmacológico, los datos de laboratorio, la actividad de la AR, la evaluación de las erosiones óseas con radiografías de manos y pies.

De pacientes con AR con erosión ósea, pacientes con OA y controles se recolectará sangre entera; de pacientes con AR sin erosión ósea se recogerá sangre entera. Se aislarán células mononucleares de sangre completa y se recolectará plasma. Se recolectará un tubo adicional para la recuperación de suero para realizar la dosificación de CHGA. Tanto de pacientes con AR como con OA se recolectará líquido sinovial junto con las células mononucleares presentes en este líquido y de pacientes con AR y OA candidatos a reemplazo articular total se recolectarán fragmentos de membrana sinovial, cartílago, hueso y médula ósea durante la cirugía como material de desecho .

Las células nucleares aisladas de sangre total, líquido sinovial y médula ósea se caracterizarán utilizando un panel de marcadores indicado por el Proyecto de Inmunología Humana.

Se realizarán matrices de proteínas en muestras de plasma obtenidas de pacientes con AR, OA y controles para identificar un panel de proteínas de fase aguda, citoquinas y quimioquinas presentes en niveles sistémicos y para resaltar analogías y diferencias en el perfil de proteínas sistémicas.

El líquido sinovial se utilizará para identificar las proteínas presentes en el líquido sinovial de pacientes con AR y OA. El objetivo principal identificado se cuantificará y utilizará como marcador de progresión de la erosión, para desarrollar terapias farmacológicas intraarticulares y para sugerir las dosis terapéuticas de los fármacos. El mismo tipo de análisis se realizará incluso en tejidos obtenidos de pacientes quirúrgicos (pacientes con AR y OA) para establecer las vías involucradas y los objetivos específicos del tejido a estimular, es decir, con factores tróficos, para promover la homeostasis tisular después de apagar el Procesos autoinmunes e inflamatorios.

Para alcanzar este objetivo, los perfiles proteicos caracterizados serán evaluados funcionalmente utilizando técnicas de Biología de Sistemas basadas en el estudio de redes de interacción proteína-proteína (PPI) (8). Además, los perfiles de proteínas se procesarán mediante estadísticas (Pearson, Spearman) capaces de evaluar la dependencia entre variables y permitir la construcción de redes de coexpresión de proteínas (9). En ambos casos, PPI y/o redes de coexpresión, el estudio de la estructura de las redes permitirá identificar hubs, cuellos de botella y módulos (10) típicos de los pacientes con AR con o sin erosión.

El suero se enviará al IRCCS Ospedale San Raffaele para la cuantificación de la cromogranina A. Parte de las células obtenidas de sangre total y líquido sinovial se enviarán al IRCCS Ospedale pediatrico Bambino Gesù (Roma, Italia) para su posterior análisis inmunológico.