Identifiering av nya molekylära mål för patienter med reumatoid artrit

Det allmänna syftet är att studera mekanismerna för dissociationen mellan den inflammatoriska aktiviteten och ledernas förstörelse hos patienter med reumatoid artrit (RA) i remission men med en progression av benerosionerna.

Det primära syftet är att upptäcka skillnader mellan patienter med AR i klinisk remission, men med progressiv artikulär erosion och patienter i fullständig klinisk och radiologisk remission, genom att karakterisera proteinerna, särskilt kromogranin A (CHGA), som finns både på artikulära och systemiska nivåer.

De sekundära målen är: att karakterisera det cellulära inflammatoriska intraartikulära infiltratet och cellerna i immunsystemet som finns i cirkulationen; att karakterisera proteinprofilen hos cellerna som finns i synovium, brosk och ben i den skadade artikulationen. Det antas att med detta tillvägagångssätt är det möjligt att detektera protein eller cellulära markörer som kan identifiera patienter som riskerar att utvecklas mot artikulär erosion tidigt och att identifiera specifika cellulära och proteinmål för utveckling av lokala eller systemiska terapier som är lämpliga för kontroll av den erosiva RA.

Detta är en observationsstudie med ytterligare procedur, domstol, prospektiv studie. 160 patienter 80 RA-patienter (Grupp 1) varav:

• Grupp 1A: minst 10 patienter, maximalt 70, med RA i remission, men med progressiv benerosion som måste genomgå ett kirurgiskt ingrepp.
• Grupp 1B: minst 10 patienter max 70, med RA i remission, utan benerosion En grupp på 80 kontroller,
• Grupp 2: 10 patienter med artros (OA) som måste genomgå ett kirurgiskt ingrepp.
• Grupp 3:70 utan RA och OA men inlagd på sjukhus för annan ortopedisk patologi som måste genomgå ett kirurgiskt ingrepp.

Eftersom flera praktiska frågor (t.ex. olämplighet eller låg mängd biologiskt material) kan förekomma, föreställer vi oss möjligheten att rekrytera ytterligare patienter tills kompletta prover uppnåtts för de beskrivna grupperna.

Manliga och kvinnliga RA-patienter i klinisk remission eller inte, artrospatienter och patienter inlagda på sjukhus för någon annan ortopedipatologi (används som kontroller) kommer att registreras. För RA-patienterna kommer farmakologisk behandling, laboratoriedata, RA-aktivitet, bedömning av benerosion med röntgen av händer och fötter att registreras.

Från RA-patienter med benerosion, OA-patienter och kontroller kommer helblod att samlas in; från RA-patienter utan benerosion kommer helblod att samlas in. Från helblod kommer mononukleära celler att isoleras och plasma kommer att skördas. Ytterligare ett rör kommer att samlas in för serumåtervinning för att utföra CHGA-dosering. Från både RA- och OA-patienter kommer synovialvätska att samlas upp tillsammans med mononukleära celler som finns i denna vätska och från både RA- och OA-patienter kommer kandidater för totala artikulära ersättningsfragment av synovialmembran, brosk, ben och benmärg att samlas in under operationen som avfallsmaterial .

Kärncellerna isolerade från helblod, ledvätska och benmärg kommer att karakteriseras med hjälp av en panel av markörer som indikeras av Human Immunology Project.

Proteinarrayer på plasmaprover som erhållits från RA, OA-patienter och kontroller kommer att utföras för att identifiera en panel av akutfasproteiner, cytokiner och kemokiner som finns på systemiska nivåer och för att belysa analogier och skillnader i den systemiska proteinprofilen.

Ledvätskan kommer att användas för att identifiera de proteiner som finns i ledvätskan hos RA- och OA-patienter. Det huvudsakliga identifierade målet kommer att kvantifieras och användas som markörer för erosionsprogression, för att utveckla intraartikulära farmakologiska terapier och för att föreslå terapeutiska doser av läkemedel. Samma typ av analys kommer att utföras även på vävnader som erhållits från kirurgiska patienter (RA- och OA-patienter) för att fastställa de inblandade vägarna och de vävnadsspecifika mål som ska stimuleras, d.v.s. med trofiska faktorer, för att främja vävnadens homeostas efter avstängning av autoimmuna och inflammatoriska processer.

För att nå detta mål kommer de karakteriserade proteinprofilerna att funktionellt utvärderas med hjälp av systembiologitekniker baserade på studiet av protein-protein (PPI) interaktionsnätverk (8). Dessutom kommer proteinprofilerna att bearbetas med hjälp av statistik (Pearson, Spearman) som kan utvärdera beroendet mellan variabler och för att möjliggöra uppbyggnaden av proteinsamuttrycksnätverk (9). I båda fallen, PPI- och/eller samuttrycksnätverk, kommer studien av nätverksstrukturen att möjliggöra identifiering av nav, flaskhalsar och moduler (10) som är typiska för RA-patienter med eller utan erosion.

Serum kommer att skickas till IRCCS Ospedale San Raffaele för kvantifiering av kromogranin A. En del av celler erhållna från helblod och ledvätska kommer att skickas till IRCCS Ospedale pediatrico Bambino Gesù (Rom, Italien) för vidare immunologisk analys.