Identyfikacja nowych celów molekularnych dla pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów

Ogólnym celem jest zbadanie mechanizmów dysocjacji między aktywnością zapalną a destrukcją stawów u pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów (RZS) w stanie remisji, ale z progresją nadżerek kostnych.

Podstawowym celem jest wykrycie różnic między pacjentami z AR w remisji klinicznej, ale z postępującą nadżerką stawową, a pacjentami z całkowitą remisją kliniczną i radiologiczną, poprzez scharakteryzowanie białek, zwłaszcza chromograniny A (CHGA), obecnych zarówno na poziomie stawowym, jak i ogólnoustrojowym.

Cele drugorzędne to: scharakteryzowanie komórkowego nacieku zapalnego śródstawowego oraz komórek układu immunologicznego obecnych w krążeniu; scharakteryzowanie profilu białkowego komórek błony maziowej, chrząstki i kości uszkodzonego stawu. Przypuszcza się, że dzięki takiemu podejściu możliwe jest wykrycie białkowych lub komórkowych markerów zdolnych do wczesnej identyfikacji pacjentów zagrożonych postępem erozji stawowej oraz do identyfikacji specyficznych celów komórkowych i białkowych w celu opracowania lokalnych lub ogólnoustrojowych terapii odpowiednich do kontroli nadżerek. erozyjne RZS.

Jest to badanie obserwacyjne z dodatkową procedurą, sądowe, prospektywne. 160 pacjentów 80 pacjentów z RZS (Grupa 1), w tym:

• Grupa 1A: co najmniej 10 pacjentów, maksymalnie 70, z RZS w remisji, ale z postępującą erozją kości, którzy muszą zostać poddani zabiegowi chirurgicznemu.
• Grupa 1B: co najmniej 10 pacjentów maksymalnie 70, z RZS w remisji, bez nadżerek kostnych Grupa 80 kontrolna,
• Grupa 2: 10 pacjentów z chorobą zwyrodnieniową stawów (ChZS), którzy muszą przejść zabieg chirurgiczny.
• Grupa 3:70 bez RZS i OA, ale hospitalizowana z powodu jakiejkolwiek innej patologii ortopedycznej, która musi przejść zabieg chirurgiczny.

Ponieważ kilka kwestii praktycznych (m.in. może wystąpić nieprzydatność lub mała ilość materiału biologicznego), przewidujemy możliwość rekrutacji dodatkowych pacjentów do czasu uzyskania kompletnych próbek dla opisanych grup.

Pacjenci płci męskiej i żeńskiej z RZS w remisji klinicznej lub bez, pacjenci z chorobą zwyrodnieniową stawów i pacjenci hospitalizowani z powodu jakiejkolwiek innej patologii ortopedycznej (wykorzystani jako grupa kontrolna) zostaną włączeni do badania. W przypadku pacjentów z RZS rejestrowane będą: leczenie farmakologiczne, dane laboratoryjne, aktywność RZS, ocena nadżerek kostnych na rtg dłoni i stóp.

Od pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów z erozją kości, pacjentów z chorobą zwyrodnieniową stawów iz grupy kontrolnej zostanie pobrana pełna krew; od pacjentów z RZS bez nadżerek kostnych zostanie pobrana pełna krew. Z krwi pełnej zostaną wyizolowane komórki jednojądrzaste i pobrane zostanie osocze. Kolejna probówka zostanie pobrana w celu pobrania surowicy w celu podania dawki CHGA. Od pacjentów z RZS i OA pobrany zostanie płyn stawowy wraz z komórkami jednojądrzastymi obecnymi w tym płynie, a od pacjentów z RZS i OA kandydujących do całkowitej wymiany stawowej fragmenty błony maziowej, chrząstki, kości i szpiku kostnego zostaną pobrane podczas operacji jako materiał odpadowy .

Komórki jądrowe wyizolowane z pełnej krwi, płynu maziowego i szpiku kostnego zostaną scharakteryzowane za pomocą zestawu markerów wskazanych przez Human Immunology Project.

Macierze białek na próbkach osocza uzyskanych od pacjentów z RZS, OA i kontroli zostaną wykonane w celu zidentyfikowania panelu białek ostrej fazy, cytokin i chemokin obecnych na poziomie ogólnoustrojowym oraz w celu podkreślenia analogii i różnic w ogólnoustrojowym profilu białkowym.

Płyn maziowy zostanie wykorzystany do identyfikacji białek obecnych w płynie maziowym pacjentów z RZS i OA. Główny zidentyfikowany cel zostanie określony ilościowo i wykorzystany jako marker postępu erozji, do opracowania dostawowych terapii farmakologicznych oraz do zasugerowania terapeutycznych dawek leków. Ten sam rodzaj analizy zostanie przeprowadzony nawet na tkankach pobranych od pacjentów chirurgicznych (pacjentów z RZS i OA) w celu ustalenia zaangażowanych szlaków i specyficznych dla tkanki celów, które mają być stymulowane, tj. procesy autoimmunologiczne i zapalne.

Aby osiągnąć ten cel, scharakteryzowane profile białek zostaną ocenione funkcjonalnie przy użyciu technik biologii systemowej opartych na badaniu sieci interakcji białko-białko (PPI) (8). Ponadto profile białek będą przetwarzane z wykorzystaniem statystyk (Pearson, Spearman) zdolnych do oceny zależności między zmiennymi i umożliwiających budowanie sieci koekspresji białek (9). W obu przypadkach, PPI i/lub sieci koekspresyjne, badanie struktury sieci pozwoli na identyfikację węzłów, wąskich gardeł i modułów (10) typowych dla pacjentów z RZS z erozją lub bez.

Surowica zostanie przesłana do IRCCS Ospedale San Raffaele w celu oznaczenia ilościowego chromograniny A. Część komórek uzyskanych z krwi pełnej i płynu maziowego zostanie wysłana do IRCCS Ospedale pediatrico Bambino Gesù (Rzym, Włochy) w celu dalszej analizy immunologicznej.