Identifikasjon av nye molekylære mål for pasienter med revmatoid artritt

Det generelle målet er å studere mekanismene for dissosiasjonen mellom den inflammatoriske aktiviteten og leddødeleggelsen hos pasienter med revmatoid artritt (RA) i remisjon, men som viser en progresjon av beinerosjonene.

Hovedmålet er å oppdage forskjeller mellom pasienter med AR i klinisk remisjon, men med progressiv artikulær erosjon og pasienter i fullstendig klinisk og radiologisk remisjon, ved å karakterisere proteinene, spesielt kromogranin A (CHGA), som er tilstede både på artikulært og systemisk nivå.

De sekundære målene er: å karakterisere det cellulære inflammatoriske intraartikulære infiltratet og cellene i immunsystemet som er tilstede i sirkulasjonen; å karakterisere proteinprofilen til cellene i synovium, brusk og bein i den skadede artikulasjonen. Det antas at med denne tilnærmingen er det mulig å oppdage protein- eller cellulære markører som er i stand til å identifisere pasienter med risiko for å utvikle seg mot artikulær erosjon tidlig og å identifisere spesifikke cellulære og proteinmål for utvikling av lokale eller systemiske terapier egnet for kontroll av den erosive RA.

Dette er en observasjonsstudie med tilleggsprosedyre, domstol, prospektiv studie. 160 pasienter 80 RA-pasienter (gruppe 1) hvorav:

• Gruppe 1A: minst 10 pasienter, maksimalt 70, med RA i remisjon, men med progressiv benerosjon som må gjennomgå en kirurgisk prosedyre.
• Gruppe 1B: minst 10 pasienter maksimalt 70, med RA i remisjon, uten beinerosjon En gruppe på 80 kontroller,
• Gruppe 2: 10 pasienter med artrose (OA) som skal gjennom et kirurgisk inngrep.
• Gruppe 3:70 uten RA og OA men innlagt på sykehus for annen ortopedisk patologi som må gjennomgå et kirurgisk inngrep.

Siden flere praktiske problemer (f.eks. uegnethet eller lav mengde biologisk materiale) kan oppstå, ser vi for oss muligheten for å rekruttere ytterligere pasienter inntil komplette prøver for de beskrevne gruppene er oppnådd.

Mannlige og kvinnelige RA-pasienter i klinisk remisjon eller ikke, slitasjegiktpasienter og pasienter innlagt på sykehus for annen ortopedipatologi (brukt som kontroller) vil bli registrert. For RA-pasientene vil det bli registrert farmakologisk behandling, laboratoriedata, RA-aktivitet, vurdering av beinerosjoner med hender og føtter.

Fra RA-pasienter med beinerosjon, OA-pasienter og kontroller vil det samles inn fullblod; fra RA-pasienter uten benerosjon vil det bli samlet inn fullblod. Fra fullblod vil mononukleære celler bli isolert og plasma vil bli høstet. Et ytterligere rør vil bli samlet inn for serumuthenting for å utføre CHGA-dosering. Fra både RA- og OA-pasienter vil det samles opp leddvæske sammen med mononukleære celler som er tilstede i denne væsken, og fra både RA- og OA-pasienter vil kandidater for total ledderstatningsfragmenter av leddmembran, brusk, bein og benmarg bli samlet inn under operasjonen som avfallsmateriale .

Kjernecellene isolert fra fullblod, leddvæske og benmarg vil bli karakterisert ved hjelp av et panel av markører indikert av Human Immunology Project.

Proteinarrayer på plasmaprøver innhentet fra RA, OA-pasienter og kontroller vil bli utført for å identifisere et panel av akuttfaseproteiner, cytokiner og kjemokiner tilstede på systemiske nivåer og for å fremheve analogier og forskjeller i den systemiske proteinprofilen.

Leddvæsken vil bli brukt til å identifisere proteinene som finnes i leddvæsken til RA- og OA-pasienter. Det viktigste identifiserte målet vil bli kvantifisert og brukt som markører for erosjonsprogresjon, for å utvikle intraartikulære farmakologiske terapier og for å foreslå terapeutiske doser av legemidler. Den samme typen analyse vil bli utført selv på vev hentet fra kirurgiske pasienter (RA- og OA-pasienter) for å etablere de involverte banene og de vevsspesifikke målene som skal stimuleres, det vil si med trofiske faktorer, for å fremme vevshomeostasen etter å ha slått av autoimmune og inflammatoriske prosesser.

For å nå dette målet vil de karakteriserte proteinprofilene bli funksjonelt evaluert ved å bruke systembiologiske teknikker basert på studiet av protein-protein (PPI) interaksjonsnettverk (8). Dessuten vil proteinprofilene bli behandlet ved hjelp av statistikk (Pearson, Spearman) som er i stand til å evaluere avhengigheten mellom variabler og for å tillate bygging av proteinsamekspresjonsnettverk (9). I begge tilfeller, PPI og/eller co-ekspresjonsnettverk, vil studiet av nettverksstrukturen tillate identifisering av hubs, flaskehalser og moduler (10) som er typiske for RA-pasienter med eller uten erosjon.

Serum vil bli sendt til IRCCS Ospedale San Raffaele for kvantifisering av kromogranin A. En del av celler hentet fra fullblod og leddvæske vil bli sendt til IRCCS Ospedale pediatrico Bambino Gesù (Roma, Italia) for videre immunologisk analyse.