Identificazione di nuovi bersagli molecolari per i pazienti con artrite reumatoide

L'obiettivo generale è quello di studiare i meccanismi della dissociazione tra l'attività infiammatoria e la distruzione articolare in pazienti con artrite reumatoide (RA) in remissione ma che presentano una progressione delle erosioni ossee.

Lo scopo primario è quello di rilevare differenze tra pazienti con AR in remissione clinica, ma che presentano progressiva erosione articolare e pazienti in completa remissione clinica e radiologica, caratterizzando le proteine, in particolare la cromogranina A (CHGA), presenti sia a livello articolare che sistemico.

Gli scopi secondari sono: caratterizzare l'infiltrato infiammatorio cellulare intrarticolare e le cellule del sistema immunitario presenti in circolo; caratterizzare il profilo proteico delle cellule residenti nella sinovia, nella cartilagine e nell'osso dell'articolazione danneggiata. Si ipotizza che con questo approccio sia possibile rilevare marcatori proteici o cellulari in grado di identificare precocemente i pazienti a rischio di progressione verso l'erosione articolare e identificare specifici bersagli cellulari e proteici per lo sviluppo di terapie locali o sistemiche atte al controllo della l'AR erosiva.

Questo è uno studio prospettico osservazionale con procedura aggiuntiva, tribunale. 160 pazienti 80 pazienti AR (Gruppo 1) di cui:

• Gruppo 1A: almeno 10 pazienti, massimo 70, con AR in remissione, ma con progressiva erosione ossea che devono essere sottoposti ad intervento chirurgico.
• Gruppo 1B: almeno 10 pazienti massimo 70, con AR in remissione, senza erosione ossea Un gruppo di 80 controlli,
• Gruppo 2: 10 pazienti con osteoartrosi (OA) che devono sottoporsi a intervento chirurgico.
• Gruppo 3:70 senza AR e OA ma ricoverato per qualsiasi altra patologia ortopedica che deve sottoporsi ad intervento chirurgico.

Poiché diversi problemi pratici (ad es. inidoneità o scarsa quantità di materiale biologico), si prevede la possibilità di reclutare ulteriori pazienti fino al raggiungimento di campioni completi per i gruppi descritti.

Saranno arruolati pazienti maschi e femmine con AR in remissione clinica o meno, pazienti con artrosi e pazienti ricoverati per qualsiasi altra patologia ortopedica (usati come controlli). Per i pazienti con AR, verranno registrati il ​​trattamento farmacologico, i dati di laboratorio, l'attività dell'AR, la valutazione delle erosioni ossee con radiografia delle mani e dei piedi.

Da pazienti affetti da AR con erosione ossea, pazienti con OA e controlli verrà prelevato sangue intero; da pazienti affetti da AR senza erosione ossea verrà prelevato sangue intero. Dal sangue intero verranno isolate cellule mononucleate e raccolto il plasma. Un'ulteriore provetta verrà raccolta per il recupero del siero per eseguire il dosaggio di CHGA. Da entrambi i pazienti con AR e OA verrà raccolto il liquido sinoviale insieme alle cellule mononucleate presenti in questo fluido e da entrambi i pazienti con AR e OA candidati per la sostituzione articolare totale frammenti di membrana sinoviale, cartilagine, osso e midollo osseo saranno raccolti durante l'intervento chirurgico come materiale di scarto .

Le cellule nucleari isolate da sangue intero, liquido sinoviale e midollo osseo saranno caratterizzate utilizzando un pannello di marcatori indicati dal Progetto Immunologia Umana.

Verranno eseguiti array di proteine ​​su campioni di plasma ottenuti da pazienti affetti da AR, OA e controlli per identificare un pannello di proteine ​​di fase acuta, citochine e chemochine presenti a livello sistemico e per evidenziare analogie e differenze nel profilo proteico sistemico.

Il liquido sinoviale sarà utilizzato per identificare le proteine ​​presenti nel liquido sinoviale dei pazienti affetti da AR e OA. I principali bersagli individuati saranno quantificati e utilizzati come marcatori di progressione dell'erosione, per sviluppare terapie farmacologiche intra-articolari e per suggerire le dosi terapeutiche dei farmaci. Lo stesso tipo di analisi verrà eseguito anche su tessuti ottenuti da pazienti chirurgici (pazienti con AR e OA) per stabilire le vie coinvolte e i bersagli tessuto specifici da stimolare, cioè con fattori trofici, per promuovere l'omeostasi tissutale dopo lo spegnimento del processi autoimmuni e infiammatori.

Per raggiungere questo obiettivo, i profili proteici caratterizzati saranno valutati funzionalmente utilizzando tecniche di Systems Biology basate sullo studio delle reti di interazione proteina-proteina (PPI) (8). Inoltre, i profili proteici saranno elaborati utilizzando statistiche (Pearson, Spearman) in grado di valutare la dipendenza tra variabili e consentire la costruzione di reti di coespressione proteica (9). In entrambi i casi, PPI e/o reti di coespressione, lo studio della struttura delle reti consentirà l'identificazione di hub, colli di bottiglia e moduli (10) tipici dei pazienti con AR con o senza erosione.

Il siero sarà inviato all'IRCCS Ospedale San Raffaele per la quantificazione della cromogranina A. Una parte delle cellule ottenute da sangue intero e liquido sinoviale sarà inviata all'IRCCS Ospedale pediatrico Bambino Gesù (Roma, Italia) per ulteriori analisi immunologiche.