Identificação de novos alvos moleculares para pacientes com artrite reumatóide

O objetivo geral é estudar os mecanismos da dissociação entre a atividade inflamatória e a destruição articular em pacientes com artrite reumatoide (AR) em remissão, mas apresentando progressão das erosões ósseas.

O objetivo principal é detectar diferenças entre pacientes com RA em remissão clínica, mas apresentando erosão articular progressiva e pacientes em remissão clínica e radiológica completa, caracterizando as proteínas, principalmente a cromogranina A (CHGA), presentes tanto em nível articular quanto sistêmico.

Os objetivos secundários são: caracterizar o infiltrado intra-articular inflamatório celular e as células do sistema imune presentes na circulação; caracterizar o perfil protéico das células residentes na sinóvia, cartilagem e osso da articulação lesada. Hipotetiza-se que com esta abordagem é possível detectar proteínas ou marcadores celulares capazes de identificar precocemente os pacientes em risco de evoluir para a erosão articular e identificar alvos celulares e proteicos específicos para o desenvolvimento de terapias locais ou sistêmicas adequadas para o controle de a AR erosiva.

Este é um estudo observacional com procedimento adicional, tribunal, prospectivo. 160 pacientes 80 pacientes com AR (Grupo 1) dos quais:

• Grupo 1A: mínimo de 10 pacientes, máximo de 70, com AR em remissão, mas apresentando erosão óssea progressiva que devem ser submetidos a procedimento cirúrgico.
• Grupo 1B: pelo menos 10 pacientes no máximo 70, com AR em remissão, sem erosão óssea Um grupo de 80 controles,
• Grupo 2: 10 pacientes com osteoartrite (OA) que devem ser submetidos a procedimento cirúrgico.
• Grupo 3:70 sem AR e OA mas internados por qualquer outra patologia ortopédica que devem ser submetidos a procedimento cirúrgico.

Uma vez que várias questões práticas (p. inadequação ou baixa quantidade de material biológico), vislumbramos a possibilidade de recrutar pacientes adicionais até a obtenção de amostras completas para os grupos descritos.

Serão incluídos pacientes do sexo masculino e feminino com AR em remissão clínica ou não, osteoartrite e pacientes internados por qualquer outra patologia ortopédica (usados ​​como controles). Para os pacientes com AR, serão registrados tratamento farmacológico, dados laboratoriais, atividade da AR, avaliação de erosões ósseas com radiografia de mãos e pés.

Será coletado sangue total de pacientes com AR com erosão óssea, pacientes com OA e controles; de pacientes com AR sem erosão óssea será coletado sangue total. A partir do sangue total, as células mononucleares serão isoladas e o plasma será colhido. Um outro tubo será coletado para retirada de soro para realização da dosagem de CHGA. De pacientes com AR e OA, o líquido sinovial será coletado juntamente com células mononucleares presentes neste fluido e, de pacientes com AR e OA candidatos à substituição articular total, fragmentos de membrana sinovial, cartilagem, osso e medula óssea serão coletados durante a cirurgia como material residual .

As células nucleares isoladas de sangue total, líquido sinovial e medula óssea serão caracterizadas por meio de um painel de marcadores indicados pelo Projeto de Imunologia Humana.

Arranjos de proteínas em amostras de plasma obtidas de pacientes com AR, OA e controles serão realizados para identificar um painel de proteínas de fase aguda, citocinas e quimiocinas presentes em níveis sistêmicos e para destacar analogias e diferenças no perfil proteico sistêmico.

O líquido sinovial será utilizado para identificar as proteínas presentes no líquido sinovial de pacientes com AR e OA. Os principais alvos identificados serão quantificados e utilizados como marcadores da progressão da erosão, para desenvolver terapias farmacológicas intra-articulares e para sugerir as doses terapêuticas de drogas. O mesmo tipo de análise será realizado mesmo em tecidos obtidos de pacientes cirúrgicos (pacientes com AR e OA) para estabelecer as vias envolvidas e os alvos específicos do tecido a serem estimulados, ou seja, com fatores tróficos, para promover a homeostase do tecido após o desligamento do processos autoimunes e inflamatórios.

Para atingir este objetivo, os perfis proteicos caracterizados serão avaliados funcionalmente por meio de técnicas de Biologia de Sistemas baseadas no estudo de redes de interação proteína-proteína (PPI) (8). Além disso, os perfis de proteínas serão processados ​​usando estatísticas (Pearson, Spearman) capazes de avaliar a dependência entre variáveis ​​e permitir a construção de redes de co-expressão de proteínas (9). Em ambos os casos, PPI e/ou redes de co-expressão, o estudo da estrutura das redes permitirá a identificação de hubs, gargalos e módulos (10) típicos dos pacientes com AR com ou sem erosão.

O soro será enviado ao IRCCS Ospedale San Raffaele para a quantificação da cromogranina A. Parte das células obtidas de sangue total e líquido sinovial serão enviadas ao IRCCS Ospedale pediátrico Bambino Gesù (Roma, Itália) para posterior análise imunológica.