Új molekuláris célpontok azonosítása rheumatoid arthritises betegek számára

Az általános cél a gyulladásos aktivitás és az ízületi destrukció közötti disszociáció mechanizmusának tanulmányozása remisszióban lévő, de a csonterózió progresszióját mutató rheumatoid arthritisben (RA) szenvedő betegeknél.

Az elsődleges cél a klinikai remisszióban lévő, de progresszív ízületi eróziót mutató AR-ban szenvedő betegek és a teljes klinikai és radiológiai remisszióban lévő betegek közötti különbségek kimutatása az ízületi és szisztémás szinten egyaránt jelenlévő fehérjék, különösen a kromogranin A (CHGA) jellemzésével.

Másodlagos célok: a sejtes gyulladásos intraartikuláris infiltrátum és a keringésben jelenlévő immunrendszer sejtjeinek jellemzése; a sérült ízületi ízületben, porcban és csontban található sejtek fehérjeprofiljának jellemzésére. Feltételezhető, hogy ezzel a megközelítéssel lehetővé válik olyan fehérje- vagy sejtmarkerek kimutatása, amelyek képesek korán azonosítani azokat a betegeket, akiknél fennáll az ízületi erózió felé való előrehaladás, és specifikus sejt- és fehérjecélpontok azonosítása az ízületi erózió szabályozására alkalmas lokális vagy szisztémás terápiák kifejlesztéséhez. az eróziós RA.

Ez egy megfigyeléses, további eljárással, bírósági, prospektív tanulmány. 160 beteg 80 RA beteg (1. csoport), ebből:

• 1A csoport: legalább 10, maximum 70 beteg, akiknél az RA remisszióban van, de progresszív csonteróziót mutatnak, akiket sebészeti beavatkozásnak kell alávetni.
• 1B csoport: legalább 10 beteg, maximum 70, RA remisszióban, csonterózió nélkül. 80 főből álló kontrollcsoport,
• 2. csoport: 10 osteoarthritisben (OA) szenvedő beteg, akiknek sebészeti beavatkozáson kell átesni.
• 3:70-es csoport RA és OA nélkül, de bármilyen más ortopédiai patológia miatt kórházba kerül, akinél sebészeti beavatkozáson kell átesni.

Mivel számos gyakorlati kérdés (pl. alkalmatlanság vagy kevés biológiai anyag) előfordulhat, további betegek toborzását képzeljük el a leírt csoportok teljes mintájának megszerzéséig.

Férfi és női RA-betegek klinikai remisszióban vagy sem, osteoarthritisben szenvedő betegek és bármely más ortopédiai patológia miatt kórházba került (kontrollként használt) betegek. Az RA-s betegeknél a gyógyszeres kezelést, a laboratóriumi adatokat, az RA aktivitást, a csonteróziók felmérését kéz- és lábröntgennel rögzítik.

A csonterózióban szenvedő RA-betegektől, az OA-s betegektől és a kontrollcsoportoktól teljes vért vesznek; a csonterózió nélküli RA-s betegek teljes vérét gyűjtik. A teljes vérből mononukleáris sejteket izolálnak és plazmát gyűjtenek. Egy további csövet gyűjtünk a szérum kinyeréséhez a CHGA adagolásához. Mind az RA-s, mind az OA-s betegek ízületi folyadékát az ebben a folyadékban jelenlévő mononukleáris sejtekkel együtt gyűjtik, mind az RA-s, mind az OA-s betegektől az ízületi membrán, porc, csont és csontvelő teljes ízületi pótlásra jelölt fragmentumait gyűjtik a műtét során hulladékanyagként. .

A teljes vérből, ízületi folyadékból és csontvelőből izolált nukleáris sejteket a Human Immunology Project által jelzett markerek panelje segítségével jellemezzük.

A RA-ban, OA-ban szenvedő betegektől és kontrolloktól vett plazmamintákon fehérjetömböket készítenek, hogy azonosítsák a szisztémás szinten jelenlévő akut fázisú fehérjéket, citokineket és kemokineket, és kiemeljék a szisztémás fehérjeprofil analógiáit és különbségeit.

Az ízületi folyadékot az RA és OA betegek ízületi folyadékában jelenlévő fehérjék azonosítására fogják használni. A fő azonosított célpontot számszerűsítik, és az erózió progressziójának markereiként használják fel, intraartikuláris farmakológiai terápiák kidolgozására és a gyógyszerek terápiás dózisainak javaslatára. Ugyanilyen típusú elemzést végeznek még a sebészeti betegektől (RA és OA betegek) származó szöveteken is, hogy megállapítsák az érintett útvonalakat és a stimulálandó szövetspecifikus célpontokat, azaz trofikus faktorokkal, hogy elősegítsék a szöveti homeosztázist a kikapcsolás után. autoimmun és gyulladásos folyamatok.

E cél elérése érdekében a jellemzett fehérjeprofilokat funkcionálisan értékeljük a protein-protein (PPI) interakciós hálózatok vizsgálatán alapuló Systems Biology technikák segítségével (8). Ezen túlmenően a fehérjeprofilokat statisztikai adatok segítségével dolgozzák fel (Pearson, Spearman), amelyek képesek értékelni a változók közötti függőséget, és lehetővé teszik a fehérje koexpressziós hálózatok kiépítését (9). Mindkét esetben, a PPI és/vagy a koexpressziós hálózatok esetében, a hálózatok szerkezetének vizsgálata lehetővé teszi az eróziós vagy anélküli RA-betegekre jellemző csomópontok, szűk keresztmetszetek és modulusok (10) azonosítását.

A szérumot elküldik az IRCCS Ospedale San Raffaele-nek a kromogranin A mennyiségi meghatározására. A teljes vérből és ízületi folyadékból nyert sejtek egy részét az IRCCS Ospedale pediatrico Bambino Gesù-hez (Róma, Olaszország) továbbítják további immunológiai elemzés céljából.