Identifizierung neuer molekularer Ziele für Patienten mit rheumatoider Arthritis

Das allgemeine Ziel besteht darin, die Mechanismen der Dissoziation zwischen der Entzündungsaktivität und der Gelenkzerstörung bei Patienten mit rheumatoider Arthritis (RA) in Remission, aber mit fortschreitender Knochenerosion zu untersuchen.

Das Hauptziel besteht darin, Unterschiede zwischen Patienten mit AR in klinischer Remission, die jedoch eine fortschreitende Gelenkerosion aufweisen, und Patienten in vollständiger klinischer und radiologischer Remission zu erkennen, indem die Proteine, insbesondere das Chromogranin A (CHGA), charakterisiert werden, die sowohl auf Gelenk- als auch auf systemischer Ebene vorhanden sind.

Die sekundären Ziele sind: Charakterisierung des zellulären entzündlichen intraartikulären Infiltrats und der im Kreislauf vorhandenen Zellen des Immunsystems; um das Proteinprofil der Zellen zu charakterisieren, die in der Synovia, im Knorpel und im Knochen des beschädigten Gelenks vorkommen. Es wird vermutet, dass es mit diesem Ansatz möglich ist, Protein- oder Zellmarker zu erkennen, die dazu in der Lage sind, Patienten, bei denen das Risiko einer Gelenkerosion besteht, frühzeitig zu identifizieren und spezifische Zell- und Proteinziele für die Entwicklung lokaler oder systemischer Therapien zu identifizieren, die zur Kontrolle geeignet sind die erosive RA.

Hierbei handelt es sich um eine Beobachtungsstudie mit zusätzlichem Verfahren, Gericht und prospektive Studie. 160 Patienten 80 RA-Patienten (Gruppe 1), davon:

• Gruppe 1A: mindestens 10 Patienten, maximal 70, mit RA in Remission, aber fortschreitender Knochenerosion, die sich einem chirurgischen Eingriff unterziehen müssen.
• Gruppe 1B: mindestens 10 Patienten, maximal 70, mit RA in Remission, ohne Knochenerosion. Eine Gruppe von 80 Kontrollpersonen,
• Gruppe 2: 10 Patienten mit Arthrose (OA), die sich einem chirurgischen Eingriff unterziehen müssen.
• Gruppe 3:70 ohne RA und OA, aber wegen einer anderen orthopädischen Pathologie ins Krankenhaus eingeliefert, die sich einem chirurgischen Eingriff unterziehen muss.

Da mehrere praktische Probleme (z.B. (Ungeeignetheit oder geringe Menge an biologischem Material) auftreten kann, sehen wir die Möglichkeit, zusätzliche Patienten zu rekrutieren, bis vollständige Proben für die beschriebenen Gruppen vorliegen.

Eingeschrieben werden männliche und weibliche RA-Patienten in klinischer Remission oder nicht, Arthrosepatienten und Patienten, die wegen einer anderen orthopädischen Pathologie (als Kontrollen) ins Krankenhaus eingeliefert werden. Für die RA-Patienten werden pharmakologische Behandlung, Labordaten, RA-Aktivität und Beurteilung von Knochenerosionen mit Röntgenaufnahmen von Händen und Füßen aufgezeichnet.

Von RA-Patienten mit Knochenerosion, OA-Patienten und Kontrollpersonen wird Vollblut gesammelt; Von RA-Patienten ohne Knochenerosion wird Vollblut entnommen. Aus dem Vollblut werden mononukleäre Zellen isoliert und Plasma gewonnen. Zur Serumentnahme wird ein weiteres Röhrchen entnommen, um die CHGA-Dosierung durchzuführen. Sowohl bei RA- als auch bei OA-Patienten wird Synovialflüssigkeit zusammen mit den in dieser Flüssigkeit vorhandenen mononukleären Zellen gesammelt, und sowohl bei RA- als auch bei OA-Patienten, die für einen vollständigen Gelenkersatz in Frage kommen, werden Fragmente der Synovialmembran, des Knorpels, des Knochens und des Knochenmarks während der Operation als Abfallmaterial gesammelt .

Die aus Vollblut, Synovialflüssigkeit und Knochenmark isolierten Kernzellen werden mithilfe einer Reihe von Markern charakterisiert, die vom Human Immunology Project angegeben werden.

Es werden Proteinarrays an Plasmaproben von RA-, OA-Patienten und Kontrollpersonen durchgeführt, um eine Reihe von Akute-Phase-Proteinen, Zytokinen und Chemokinen zu identifizieren, die auf systemischen Ebenen vorhanden sind, und um Analogien und Unterschiede im systemischen Proteinprofil hervorzuheben.

Die Synovialflüssigkeit wird verwendet, um die in der Synovialflüssigkeit von RA- und OA-Patienten vorhandenen Proteine ​​zu identifizieren. Das identifizierte Hauptziel wird quantifiziert und als Marker für das Fortschreiten der Erosion verwendet, um intraartikuläre pharmakologische Therapien zu entwickeln und therapeutische Dosierungen von Arzneimitteln vorzuschlagen. Die gleiche Art von Analyse wird auch an Gewebe durchgeführt, das von chirurgischen Patienten (RA- und OA-Patienten) gewonnen wurde, um die beteiligten Signalwege und die gewebespezifischen Ziele zu ermitteln, die stimuliert werden müssen, d. h. mit trophischen Faktoren, um die Gewebehomöostase nach dem Ausschalten zu fördern Autoimmun- und Entzündungsprozesse.

Um dieses Ziel zu erreichen, werden die charakterisierten Proteinprofile mithilfe systembiologischer Techniken, die auf der Untersuchung von Protein-Protein (PPI)-Interaktionsnetzwerken basieren, funktionell evaluiert (8). Darüber hinaus werden die Proteinprofile mithilfe von Statistiken (Pearson, Spearman) verarbeitet, die in der Lage sind, die Abhängigkeit zwischen Variablen zu bewerten und den Aufbau von Protein-Koexpressionsnetzwerken zu ermöglichen (9). In beiden Fällen, PPI- und/oder Koexpressionsnetzwerken, ermöglicht die Untersuchung der Netzwerkstruktur die Identifizierung von Hubs, Engpässen und Modulen (10), die typisch für RA-Patienten mit oder ohne Erosion sind.

Das Serum wird zur Quantifizierung von Chromogranin A an das IRCCS Ospedale San Raffaele geschickt. Ein Teil der aus Vollblut und Synovialflüssigkeit gewonnenen Zellen wird zur weiteren immunologischen Analyse an das IRCCS Ospedale pediatrico Bambino Gesù (Rom, Italien) geschickt.