Uusien molekyylikohteiden tunnistaminen nivelreumapotilaille

Yleisenä tavoitteena on tutkia tulehduksellisen aktiivisuuden ja nivelvaurioiden välisen dissosiaatiomekanismeja potilailla, joilla on nivelreuma (RA) remissiovaiheessa, mutta luun eroosioiden eteneminen.

Ensisijaisena tavoitteena on havaita erot potilaiden välillä, joilla on AR kliinisessä remissiossa, mutta joilla on etenevä niveleroosio, ja potilaiden välillä, joilla on täydellinen kliininen ja radiologinen remissio, karakterisoimalla proteiineja, erityisesti kromograniini A:ta (CHGA), joita esiintyy sekä nivel- että systeemitasolla.

Toissijaiset tavoitteet ovat: karakterisoida solujen tulehduksellinen nivelen sisäinen infiltraatti ja verenkierrossa olevat immuunijärjestelmän solut; vaurioituneen nivelen nivelkalvossa, rustossa ja luussa olevien solujen proteiiniprofiilin karakterisoimiseksi. Oletetaan, että tällä lähestymistavalla on mahdollista havaita proteiini- tai solumarkkerit, jotka pystyvät tunnistamaan varhaisessa vaiheessa potilaat, joilla on riski edetä kohti niveleroosiota, ja tunnistaa spesifisiä solu- ja proteiinikohteita paikallisten tai systeemisten hoitojen kehittämiseksi, jotka soveltuvat niveleroosion hallintaan. erosiivinen RA.

Tämä on havainnointi ja lisämenettely, tuomioistuin, tulevaisuudentutkimus. 160 potilasta 80 nivelreumapotilasta (ryhmä 1), joista:

• Ryhmä 1A: vähintään 10 potilasta, enintään 70, joilla on nivelreuma remissiossa, mutta joilla on etenevä luun eroosio ja joille on tehtävä kirurginen toimenpide.
• Ryhmä 1B: vähintään 10 potilasta, enintään 70, nivelreuma remissiossa, ilman luun eroosiota 80 kontrollin ryhmä,
• Ryhmä 2: 10 potilasta, joilla on nivelrikko (OA), joille on tehtävä kirurginen toimenpide.
• Ryhmä 3:70 ilman nivelreumaa ja oA:ta, mutta sairaalahoitoon minkä tahansa muun ortopedisen patologian vuoksi, jolle on tehtävä kirurginen toimenpide.

Koska monet käytännön asiat (esim. sopimattomuus tai vähäinen biologisen materiaalin määrä) voi ilmetä, kuvittelemme mahdollisuuden rekrytoida lisää potilaita, kunnes kuvattujen ryhmien täydelliset näytteet on saatu.

Mukaan otetaan miehiä ja naisia ​​nivelreumapotilaita, joilla on kliininen remissio tai ei, nivelrikkopotilaat ja potilaat, jotka on joutunut sairaalaan minkä tahansa muun ortopedisen patologian vuoksi (käytetään kontrollina). Nivelreumapotilaille tallennetaan farmakologinen hoito, laboratoriotiedot, nivelreuman aktiivisuus, luun eroosioiden arviointi käsien ja jalkojen röntgenkuvauksella.

Luueroosiota sairastavista nivelreumapotilaista kerätään kokoverta OA-potilailta ja kontrolleilta; nivelreumapotilailta, joilla ei ole luueroosiota, kerätään kokoveri. Kokoverestä eristetään mononukleaariset solut ja plasma kerätään. Toinen putki kerätään seerumin talteenottoa varten CHGA-annostuksen suorittamiseksi. Sekä RA- että OA-potilailta kerätään nivelnestettä yhdessä tässä nesteessä olevien mononukleaarisolujen kanssa, ja sekä RA- että OA-potilailta kerätään nivelkalvon, ruston, luun ja luuytimen nivelkorvausfragmentteja leikkauksen aikana jätemateriaalina. .

Kokoverestä, nivelnesteestä ja luuytimestä eristetyt tumasolut karakterisoidaan käyttämällä Human Immunology Projectin osoittamaa markkeripaneelia.

Proteiinisarjat nivelreumapotilailta, oA-potilailta ja kontrolleilta saaduille plasmanäytteille tehdään akuutin vaiheen proteiinien, sytokiinien ja kemokiinien paneelin tunnistamiseksi systeemisillä tasoilla ja analogioiden ja erojen korostamiseksi systeemisessä proteiiniprofiilissa.

Nivelnestettä käytetään RA- ja OA-potilaiden nivelnesteessä olevien proteiinien tunnistamiseen. Pääkohde määritetään ja sitä käytetään eroosion etenemisen markkereina, nivelensisäisten farmakologisten hoitojen kehittämiseen ja lääkkeiden terapeuttisten annosten ehdottamiseen. Samanlainen analyysi tehdään myös kirurgisilta potilailta (RA- ja OA-potilaat) saaduille kudoksille, jotta saadaan selville asiaan liittyvät reitit ja stimuloitavat kudosspesifiset kohteet, eli trofisilla tekijöillä kudosten homeostaasin edistämiseksi hoidon sammuttamisen jälkeen. autoimmuuni- ja tulehdusprosessit.

Tämän tavoitteen saavuttamiseksi karakterisoidut proteiiniprofiilit arvioidaan toiminnallisesti käyttämällä Systems Biology -tekniikoita, jotka perustuvat proteiini-proteiini (PPI) -vuorovaikutusverkostojen tutkimukseen (8). Lisäksi proteiiniprofiileja käsitellään tilastojen avulla (Pearson, Spearman), jotka pystyvät arvioimaan muuttujien välistä riippuvuutta ja mahdollistamaan proteiinien yhteisilmentymisverkostojen rakentamisen (9). Molemmissa tapauksissa, PPI- ja/tai yhteisilmentymisverkoissa, verkkorakenteen tutkiminen mahdollistaa nivelreumapotilaille tyypillisten napojen, pullonkaulojen ja moduuleiden (10) tunnistamisen eroosiolla tai ilman.

Seerumi lähetetään IRCCS Ospedale San Raffaeleen kromograniini A:n kvantifiointia varten. Osa kokoverestä ja nivelnesteestä saaduista soluista lähetetään IRCCS Ospedale pediatrico Bambino Gesù:lle (Rooma, Italia) immunologista lisäanalyysiä varten.