Ústní výplachy xylitolu, probiotik a chlorhexidinu proti zubnímu kazu u jedinců s vysokým rizikem (AEXPC)

Potřeba ke studiu:

Světová zdravotnická organizace definuje zubní kaz jako lokalizovaný, poeruptivní patologický proces extrémního původu zahrnující měknutí tvrdé zubní tkáně a postupující k tvorbě kavity. Proces zahrnuje bakteriální interakce v plaku nahromaděném na povrchu zubů. Streptococcus mutans v plaku je nejčastěji izolovaným organismem mezi všemi ostatními kariogeny. Fermentuje sacharózu a vzniklá kyselina způsobuje demineralizaci zubní skloviny.

Zatímco mechanické metody kontroly plaku mohou udržovat adekvátní ústní hygienu, tyto metody nejsou v populaci vhodně využívány. To vyžaduje použití doplňků k mechanickým metodám kontroly plaku ve formě ústních výplachů proti plaku. Chlorhexidin ústní voda je považována za nejúčinnější prostředek při inhibici Streptococcus mutans. Ačkoli je považován za zlatý standard, jeho nepříznivé účinky způsobené dlouhodobým používáním, jako je barvení zubů, xerostomie, změněný chuťový vjem, podráždění úst/hrdel, antimikrobiální rezistence atd., naznačuje potřebu alternativ, které byly v poslední době v literatuře rozsáhle studovány.

Xylitol používaný jako umělé sladidlo v potravinách je nekariogenní náhražka cukru. Tento polyalkohol nemůže být metabolizován ústními bakteriemi, čímž se zabrání vzniku zubního kazu. Velikost nežádoucích účinků způsobených xylitolem ve srovnání s chlorhexidinem je nevýrazná. Ačkoli studie hodnotily účinky xylitolových žvýkaček na zubní kaz, jen velmi málo z nich zkoumalo jejich účinnost jako ústní vody.

Probiotika jsou živé mikroorganismy, které při podávání v přiměřeném množství prospívají hostiteli. Zdá se, že probiotické produkty mají vliv na zdraví ústní dutiny jednotlivců tím, že podněcují prospěšné bakterie k obraně zubů a dásní před škodlivými. Výhody probiotik ve srovnání s ústní vodou chlorhexidinu spočívají v tom, že nevznikají problémy s antibiotickou rezistencí, protože obsahuje pouze komenzální flóru a při konzumaci nebyl prokázán žádný důkaz intoxikace nebo alergie.

Antimikrobiální účinnost probiotik a xylitolových ústních vod nebyla dosud srovnávána. Jejich účinky na mladou a starší populaci nebyly srovnávány. Účelem této studie je tedy porovnat antimikrobiální účinnost probiotických a xylitolových ústních vod se zlatým standardem (chlorhexidinem) u dětí a starší populace.

Cíl studie:

Porovnat antimikrobiální účinnost probiotických a xylitolových ústních vod s chlorhexidinem (zlatý standard) u dětí a starší populace s vysokým rizikem zubního kazu.

Cíle studie:

1. Stanovit hladiny Streptococcus mutans na začátku a 14 dní po intervenci u dětí a starší populace.
2. Porovnat účinnost 3 ústních výplachů při snižování hladin Streptococcus mutans u dětí a starších osob.

Materiály a metody:

Zdroj dat: Děti školní docházky ve věku 5-12 let s vysokým rizikem vzniku kazu. Starší populace nad 60 let pobývající v domovech pro seniory s vysokým rizikem vzniku kazu.

Design studie: Dvojitě slepá randomizovaná kontrolovaná studie.

Velikost vzorku: V každé skupině bude vybráno dvanáct účastníků. Se 3 produkty zapojenými v každé ze 2 skupin populace (děti a senioři) bude velikost vzorku 36 dětských účastníků a 36 starších účastníků.

Souhlas účastníků: Povolení k provedení studie v domově pro seniory bude získáno od příslušných úřadů. Podrobnosti o studiu budou účastníkům prezentovány ve formě studijního informačního listu nebo sděleny ústně v angličtině i v místním jazyce. Do studie budou zařazeni pouze způsobilí účastníci, kteří poskytnou písemný souhlas. V případě dětí bude získán písemný souhlas od opatrovníků.

Hodnocení rizika zubního kazu: Jedinci s vysokým rizikem zubního kazu budou identifikováni pomocí přizpůsobeného nástroje pro hodnocení rizika zubního kazu. Nástroj pro hodnocení rizika zubního kazu bude obsahovat informace o socioekonomickém stavu, postupech ústní hygieny, expozici fluoridům, zkušenostech s kazem u členů rodiny, příznacích sucha v ústech, množství a frekvenci příjmu slazených potravin a zkušenostech s kazem v minulosti a současnosti. Každá položka bude ohodnocena 0 nebo 1 a celkové skóre se získá sečtením skóre všech položek. Každý účastník s celkovým skóre vyšším než 5 bude považován za účastníka s vysokým rizikem vzniku kazu.

Metoda:

1. Příprava ústních vod 2. Sběr výchozích dat a mikrobiální analýza 3. Randomizace a alokace do skupin 4. Intervence 5. Sběr dat po intervenci a mikrobiální analýza

1. Příprava ústních vod:

   Bude použita ústní voda xylitol v 10procentní koncentraci. Probiotická ústní voda bude připravena s použitím komerčně dostupného probiotického produktu (Sporolac Plus prášek- 1g sáček obsahující nejméně 1,5 miliardy buněk Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium longum, Bacillus coagulans a Saccharomyces boulardii). Každý sáček se rozpustí v odměrce v 15 ml vody a použije se jako ústní voda. Bude použita komerčně dostupná ústní voda Chlorhexidin (Hexidin- 0,2 procenta chlorhexidin glukonátu) obsahující 0,2 procenta chlorhexidin glukonátu na 10 ml.

2. Základní sběr dat a mikrobiální analýza:

Vzorky plaku budou odebrány z bukálního povrchu nekariózního permanentního maxilárního prvního moláru. Odběr plaku bude proveden pomocí autoklávovaného scaleru za denního světla. Odebraný plak bude uložen v předem zvážené sterilní Eppendorfově zkumavce. Zkumavky budou po odběru plaku znovu zváženy. Hmotnost odebraného plaku (v gramech) se určí odečtením hmotnosti prázdné eppendorfovy zkumavky od hmotnosti zkumavky s odebraným plakem. Vzorky budou skladovány při -4 stupních Celsia a do jedné hodiny transportovány do kultivační laboratoře, aby se zabránilo použití transportního média.

Do zkumavky Eppendorf se přidá 1 ml fyziologického roztoku a promíchá se pro rovnoměrné rozložení plaku. Tato směs bude použita jako zásobní roztok pro sériová ředění. Ze zásobního roztoku se 100 µl přenese do sterilní zkumavky obsahující 900 µl fyziologického roztoku a vortexuje se, aby se dosáhlo ředění 1:10. Podobná ředění se připraví k získání ředění 1/10, 1/100 a 1/1000. 50 ul z každého z ředění se nanese na selektivní médium MSB (Mitis Salivarius Bacitracin Agar) metodou rozprostření. Po nanesení se agarové misky MSB (Mitis Salivarius Bacitracin Agar) umístí do anaerobní nádoby a inkubují se při 37 stupních Celsia po dobu 72 hodin.

Kolonie Streptococcus mutans budou identifikovány na základě následujících morfologických charakteristik: a) 0,5 mm vyvýšené konvexní zvlněné kolonie b) světle modrá barva s drsnými okraji c) vzhled granulovaného matného skla. Kolonie budou potvrzeny katalázovým testem (negativní katalázová reakce) a gramovým barvením (grampozitivní koky). Bakteriální kolonie budou spočítány ručně. Standardní vzorec pro stanovení jednotek tvořících kolonie (CFU) bude CFU/g= [Počet kolonií X Diluční faktor] / [Objem na miskách (v ml) X Množství plaku (v g)]

3. Randomizace a rozdělení do skupin: Po sběru dat na začátku studie budou účastníci studie rozděleni do tří skupin, skupiny A, B a C, jednoduchým náhodným výběrem (metoda loterie). Skupině A bude podána ústní voda Chlorhexidin; Skupině B bude podávána ústní voda Xylitol a ústní voda probiotická skupina C. Účastníci a vyšetřovatel budou zaslepeni z alokační sekvence.

4. Intervence: Účastníci budou požádáni, aby si jednou denně (v noci) po dobu 2 minut vyplachovali ústa pomocí 15 ml ústní vody. Zásah bude prováděn po dobu 14 dnů. Na vyplachování úst bude po dobu studia dohlížet asistent. Bude veden záznam pro dokumentaci pravidelného používání ústní vody a také pro zaznamenání případných nežádoucích účinků, které se vyskytnou během období intervence.

5. Sběr dat po intervenci: Po 14 dnech používání ústních vod budou stejné postupy zopakovány a porovnány s výchozí hodnotou.

Plán statistické analýzy: Data budou analyzována pomocí SPSS (Statistical Package for the Social Sciences Version 22.0; SPSS Incorporated, Chicago, Illinois). Porovnání před a po intervencích bude provedeno pomocí párového t testu. Srovnání mezi skupinami chlorhexidinu, probiotik a xylitolu bude provedeno pomocí ANOVA (Analysis of Variance) a Tukeyho post hoc testů. Srovnání antimikrobiální účinnosti ústních výplachů u dětí a starších osob bude provedeno pomocí nezávislého testu vzorku. Statistická významnost bude fixována na p ≤ 0,05.