Hladiny retinolu v játrech a kostech u guatemalských dospívajících a dospělých (GVAS)

Cíle:

1. Stanovit posmrtnou koncentraci jaterní a kostní VA v mrtvolách dospívajících, mladých a starších dospělých jako indikátor expozice VA v potravě
2. Posoudit vliv vysoké expozice VA na klíčové enzymy v játrech a kostní tkáni a posoudit riziko hypervitaminózy A u lidí vystavených povinnému programu hromadného obohacování vitamínem A v Guatemale.

Metodologie:

Uspořádání a odběr vzorků Mrtvoly pro tuto studii budou získány z oddělení márnic Národního institutu forenzních věd (INACIF) ve 2 nemocnicích v Guatemala City. Populace studie bude tvořit 150 mrtvol odebraných na koncentraci VA tkáně; analýza genové exprese kombinovaná s histopatologií.

Proces odběru vzorků a doba trvání Všechny vzorky budou odebrány při pitvách prováděných ve forenzní márnici INACIF. Během pitvy budou játra zvážena a informace zaznamenány. Získá se rozsah až 10 x 3 g vzorků pravého laloku jater. Každý vzorek bude řádně označen předem připravenými kódy. Vzorky jater pro histopatologickou analýzu budou uloženy v 10% pufrovaném formalínu po dobu 24 hodin před přenesením do ethanolu před zalitím, nařezáním a barvením. Všechny vzorky odebrané pro analýzu retinoidů budou zmrazeny na suchém ledu v márnici, transportovány jako takové do laboratoře a následně skladovány při -80˚C. Vzorky jater pro analýzu genové exprese budou shromážděny v roztoku RNAlater pro ochranu stability RNA a následně uloženy při -80 °C až do odeslání na Newcastle University. Jaterní VA analýza bude provedena na Newcastle University za použití zavedených metod High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Vzorky pro analýzu genové exprese budou zaslány na suchém ledu do Newcastlu pro extrakci a kvantifikaci RNA. Vzhledem k tomu, že je možné získat kvalitní RNA vhodnou pro analýzy založené na kvantitativní polymerázové řetězové reakci (q-PCR) z post mortem tkáně až 72 hodin po smrti, vzorky tkáně uložené v RNAlater do 24 hodin po smrti budou dostatečné pro analýzu genové exprese . Kromě toho zkušenosti z lidské biobanky výzkumníků v Newcastlu ukazují, že tkáňovou RNA lze úspěšně extrahovat po smrti pacienta až 72 hodin po smrti, pokud má tkáň pH vyšší než 6. Genová exprese klíčových regulačních proteinů, jako jsou LRAT a CYP26A1, bude provedena v Newcastlu. Volba genů byla založena na skutečnosti, že LRAT se může nasytit při velmi vysokých hladinách VA, což vede ke zvýšení hladin volně cirkulujících VA, které mohou být metabolizovány na kyselinu retinovou a další metabolity prostřednictvím CYP26A. Histopatologickou analýzu provedou patologové v Guatemale, přičemž digitalizované preparáty budou zaslány patologovi na Newcastle University – tyto preparáty budou analyzovat oba patologové nezávisle.

Vzorky kostí budou také získány během pitvy provedené ve forenzní márnici INACIF. Hřeben kyčelní kosti se obnaží provedením řezu a odstraněním překrývající měkké tkáně (kůže, tukové tkáně, pojivové tkáně a svalu). Periosteum a kortikální kost se odstraní osteotomií, která odhalí houbovitou kost. Bioptické jehly budou použity k odběru vzorků z houbovité kosti pro analýzu tkáňových koncentrací VA a genové exprese, jak bylo dříve popsáno na Newcastle University.

Všechny vzorky budou odeslány na Newcastle University na suchém ledu.

Délka studie Podle informací poskytnutých INACIF bylo mezi březnem a květnem 2013 provedeno 18 pitev u dětí mladších jednoho roku, 24 u dětí od 1 do 4 let, 11 u dětí od 5 do 9 let, 51 u jedinců od r. 10 až 14 let, 281 u mladistvých ve věku 15 až 19 let a 401 u mladých dospělých ve věku 20 až 24 let. Podle soudního lékaře INACIF se ~60 % z celkového počtu pitev provedených v Guatemale provádí v hlavním městě. Hlavními příčinami úmrtí u dětí do 9 let byly úrazy hlavy a další druhy traumat. Jedinci ve věku od 10 do 24 let umírali hlavně v důsledku násilí: střelné zbraně, bodnutí, dušení a různé druhy traumat.