Lever- og knogleretinolniveauer hos unge og voksne i Guatemala (GVAS)

Mål:

1. At bestemme post mortem koncentrationen af ​​lever- og knogle-VA i lig af unge, unge og ældre voksne som en indikator for eksponering for diæt-VA
2. At vurdere effekten af ​​høj VA-eksponering på nøgleenzymer i lever- og knoglevæv og at vurdere risikoen for hypervitaminose A hos personer, der er udsat for obligatorisk masse-vitamin A-berigelsesprogram i Guatemala.

Metode:

Indstilling og prøveudtagning Ligene til denne undersøgelse vil blive indhentet fra National Institute of Forensic Sciences (INACIF) afdelingslighuse på 2 hospitaler i Guatemala City. Undersøgelsespopulationen vil være 150 kadavere udtaget for VA-vævskoncentration; genekspressionsanalyse kombineret med histopatologi.

Prøveindsamlingsproces og varighed Alle prøver vil blive indsamlet under obduktioner udført på INACIF retsmedicinske lighus. Under obduktion vil leveren blive vejet og informationen registreret. En række på op til 10 x 3 g prøver af leverens højre lap vil blive opnået. Hver prøve vil være korrekt mærket med tidligere forberedte koder. Leverprøver til histopatologisk analyse vil blive opbevaret i 10 % bufret formalin i 24 timer før overførsel til ethanol før indlejring, sektionering og farvning. Alle prøver indsamlet til retinoidanalyse vil blive frosset på tøris i lighuset, transporteret som sådan til laboratoriet og efterfølgende opbevaret ved -80˚C. Leverprøver til genekspressionsanalyse vil blive indsamlet i RNAlater-opløsning for at beskytte RNA-stabilitet og efterfølgende opbevaret ved -80˚C indtil forsendelse til Newcastle University. Lever VA-analysen vil blive udført i Newcastle University ved hjælp af etablerede High Perfromance Liquid Chromatography (HPLC) metoder. Prøver til analyse af genekspression vil blive sendt på tøris til Newcastle for RNA-ekstraktion og kvantificering. Da det er muligt at opnå RNA af god kvalitet, der er egnet til kvantitativ polymerasekædereaktion (q-PCR)-baserede analyser fra post mortem væv op til 72 timer efter døden, vil vævsprøver opbevaret i RNA senere inden for 24 timer efter døden være tilstrækkelige til genekspressionsanalyse . Ydermere viser erfaringer fra efterforskernes humane biobank i Newcastle, at vævs-RNA kan udvindes med succes efter en patients død op til 72 timer efter døden, så længe vævet har en pH-værdi på over 6. Genekspression af vigtige regulatoriske proteiner, såsom LRAT og CYP26A1, vil blive udført i Newcastle. Valg af gener var baseret på det faktum, at LRAT kan blive mættet ved meget høje niveauer af VA, hvilket fører til stigende niveauer af frit cirkulerende VA, der kan metaboliseres til retinsyre og andre metabolitter via CYP26A. Histopatologiske analyser vil blive udført af patologer i Guatemala med digitaliserede dias, der sendes til patologen på Newcastle University - disse dias vil blive analyseret af begge patologer uafhængigt af hinanden.

Knogleprøver vil også blive udtaget under obduktionen udført på INACIF retsmedicinske lighus. hoftekammen vil blive blotlagt ved at lave et snit og fjerne det overliggende bløde væv (hud, fedtvæv, bindevæv og muskler). Periosteum og kortikal knogle skal fjernes via osteotomi, der blotlægger den svampede knogle. Biopsinåle vil blive brugt til at tage prøver fra den svampede knogle til analyse af vævs-VA-koncentrationer og genekspression, som tidligere beskrevet, ved Newcastle University.

Alle prøver vil blive sendt til Newcastle University på tøris.

Undersøgelsens varighed Ifølge oplysningerne fra INACIF blev der udført 18 obduktioner mellem marts og maj 2013 på børn under et år, 24 på børn fra 1 til 4 år, 11 på børn i alderen 5 til 9 år, 51 på individer fra 10 til 14 år, 281 på unge 15 til 19 år og 401 på unge voksne 20 til 24 år. Ifølge INACIFs retsmedicinske læge udføres ~60 % af det samlede antal obduktioner, der udføres i Guatemala, i hovedstaden. De vigtigste dødsårsager hos børn under 9 år var hovedskader og andre typer traumer. Personer fra 10 til 24 år døde hovedsageligt på grund af vold: skydevåben, knivstik, kvælning og forskellige typer traumer.