Maksan ja luuston retinolitasot Guatemalan nuorilla ja aikuisilla (GVAS)

Tavoitteet:

1. Maksan ja luun VA:n post mortem -pitoisuuden määrittäminen nuorten, nuorten ja iäkkäiden aikuisten ruumiissa indikaattorina altistumisesta ravinnon VA:lle
2. Arvioida korkean VA-altistuksen vaikutusta maksan ja luukudoksen avainentsyymeihin ja arvioida A-hypervitaminoosin riskiä ihmisillä, jotka ovat altistuneet pakolliselle A-vitamiinin täydennysohjelmalle Guatemalassa.

Metodologia:

Asettaminen ja näytteenotto Tätä tutkimusta varten ruumiit hankitaan National Institute of Forensic Sciences (INACIF) -osaston ruumishuoneista kahdessa Guatemala Cityn sairaalassa. Tutkimuspopulaatio koostuu 150 ruumiista, joista otetaan näyte VA-kudospitoisuuden määrittämiseksi; geeniekspressioanalyysi yhdistettynä histopatologiaan.

Näytteenottoprosessi ja kesto Kaikki näytteet kerätään ruumiinavausten yhteydessä INACIF:n rikosteknisessä ruumishuoneessa. Ruumiinavauksen aikana maksa punnitaan ja tiedot kirjataan. Maksan oikeasta lohkosta saadaan jopa 10 x 3 g:n näytteitä. Jokainen näyte merkitään asianmukaisesti aiemmin valmistetuilla koodeilla. Maksanäytteet histopatologista analyysiä varten säilytetään 10 % puskuroidussa formaliinissa 24 tuntia ennen siirtämistä etanoliin ennen upottamista, leikkausta ja värjäystä. Kaikki retinoidianalyysiä varten kerätyt näytteet pakastetaan kuivajäällä ruumishuoneessa, kuljetetaan sellaisenaan laboratorioon ja säilytetään sen jälkeen -80 ˚C:ssa. Maksanäytteet geeniekspressioanalyysiä varten kerätään RNAlater-liuokseen RNA:n stabiilisuuden suojaamiseksi ja säilytetään sen jälkeen -80 ˚C:ssa, kunnes ne lähetetään Newcastlen yliopistoon. Maksan VA-analyysi tehdään Newcastlen yliopistossa käyttäen vakiintuneita High Perfromance Liquid Chromatography (HPLC) -menetelmiä. Näytteet geeniekspression analysointia varten lähetetään kuivajäällä Newcastleen RNA:n uuttamista ja kvantifiointia varten. Koska on mahdollista saada hyvälaatuista RNA:ta, joka soveltuu kvantitatiiviseen polymeraasiketjureaktioon (q-PCR) perustuviin analyyseihin post mortem -kudoksesta jopa 72 tuntia kuoleman jälkeen, 24 tunnin kuluessa kuolemasta RNAlateriin tallennetut kudosnäytteet ovat riittäviä geeniekspressioanalyysiin. . Lisäksi Newcastlen tutkijoiden ihmisen biopankin kokemus osoittaa, että kudos-RNA voidaan erottaa onnistuneesti potilaan kuoleman jälkeen jopa 72 tuntia kuoleman jälkeen, kunhan kudoksen pH on yli 6. Keskeisten säätelyproteiinien, kuten LRAT:n ja CYP26A1:n, geeniekspressio suoritetaan Newcastlessa. Geenien valinta perustui siihen tosiasiaan, että LRAT saattaa kyllästyä erittäin korkeilla VA-tasoilla, mikä johtaa lisääntyneeseen vapaan verenkierron VA:n tasoon, joka voi metaboloitua retinoiinihapoksi ja muiksi metaboliiteiksi CYP26A:n kautta. Patologit Guatemalassa suorittavat histopatologisen analyysin, ja digitoidut diat lähetetään patologille Newcastlen yliopistossa – molemmat patologit analysoivat nämä diat itsenäisesti.

Luunäytteitä otetaan myös INACIFin oikeuslääketieteellisessä ruumishuoneessa tehtävän ruumiinavauksen yhteydessä. Suoliluun harjaluu paljastetaan tekemällä viilto ja poistamalla sen päällä oleva pehmytkudos (iho, rasvakudos, sidekudos ja lihas). Perosteum ja aivokuoren luu poistetaan osteotomian avulla paljastaen sienimäisen luun. Biopsian neuloja käytetään ottamaan näytteitä sienimäisestä luusta kudosten VA-pitoisuuksien ja geeniekspression analysoimiseksi, kuten aiemmin on kuvattu Newcastlen yliopistossa.

Kaikki näytteet toimitetaan Newcastlen yliopistoon kuivajäällä.

Tutkimuksen kesto INACIFin toimittamien tietojen mukaan maaliskuusta toukokuuhun 2013 tehtiin 18 ruumiinavausta alle vuoden ikäisille lapsille, 24 1–4-vuotiaille lapsille, 11 5–9-vuotiaille lapsille ja 51 henkilöille alkaen. 10–14-vuotiaat, 281 15–19-vuotiaat nuoret ja 401 20–24-vuotiaat nuoret aikuiset. INACIFin oikeuslääkärin mukaan noin 60 % Guatemalassa tehdyistä ruumiinavauksista tehdään pääkaupungissa. Alle 9-vuotiaiden lasten pääasialliset kuolinsyyt olivat päävammat ja muut vammat. 10–24-vuotiaat kuolivat pääosin väkivallan vuoksi: ampuma-aseet, puukot, tukehtuminen ja erilaiset traumat.