グアテマラの青年および成人における肝臓および骨のレチノールレベル (GVAS)

目的:

1. 食餌性VAへの曝露の指標として、思春期、若年および高齢者の死体における肝臓および骨VAの死後濃度を決定する
2. 肝臓および骨組織の重要な酵素に対する高VA曝露の影響を評価し、グアテマラで強制的な大量ビタミンA強化プログラムに曝露した人々のビタミンA過剰症のリスクを評価すること。 検索戦略:

方法論:

設定とサンプリング この調査のための死体は、グアテマラシティの 2 つの病院にある国立科学捜査研究所 (INACIF) の部門の遺体安置所から入手されます。 研究集団は、VA 組織濃度のためにサンプリングされた 150 の死体になります。組織病理学と組み合わせた遺伝子発現分析。

サンプル収集プロセスと期間 すべてのサンプルは、INACIF 法医学遺体安置所で行われる剖検中に収集されます。 剖検中に、肝臓の重量を量り、情報を記録します。 肝臓の右葉の最大 10 x 3 g サンプルの範囲が取得されます。 各サンプルは、以前に準備されたコードで適切にラベル付けされます。 組織病理学的分析用の肝臓サンプルは、包埋、切片化、および染色の前にエタノールに移す前に、10% 緩衝ホルマリンで 24 時間保存されます。 レチノイド分析のために収集されたすべてのサンプルは、遺体安置所のドライアイスで凍結され、そのまま研究室に運ばれ、その後-80℃で保存されます。 遺伝子発現解析用の肝臓サンプルは、RNA の安定性を保護するために RNAlater 溶液で収集され、その後ニューカッスル大学に出荷されるまで -80°C で保存されます。 肝臓のVA分析は、確立された高速液体クロマトグラフィー（HPLC）法を使用して、ニューカッスル大学で行われます。 遺伝子発現の分析用のサンプルは、RNA の抽出と定量化のためにニューカッスルにドライアイスで送られます。 死後 72 時間までの死後組織から、定量的ポリメラーゼ連鎖反応 (q-PCR) ベースの分析に適した高品質の RNA を得ることができるため、死後 24 時間以内に RNAlater に保存された組織サンプルは、遺伝子発現解析に適しています。 . さらに、ニューキャッスルの研究者であるヒトバイオバンクの経験によると、患者の死後、組織の pH が 6 を超えていれば、死後 72 時間まで組織 RNA を正常に抽出できることが示されています。 LRAT や CYP26A1 などの主要な調節タンパク質の遺伝子発現は、ニューカッスルで行われます。 遺伝子の選択は、LRAT が非常に高レベルの VA で飽和する可能性があり、CYP26A を介してレチノイン酸や他の代謝産物に代謝される自由循環 VA のレベルが増加する可能性があるという事実に基づいていました。 組織病理学的分析はグアテマラの病理学者によって行われ、デジタル化されたスライドがニューカッスル大学内の病理学者に送られます - これらのスライドは両方の病理学者によって個別に分析されます。

骨のサンプルは、INACIF 法医学遺体安置所で行われる剖検中にも採取されます。 腸骨稜の骨は、切開を行い、その上にある軟部組織 (皮膚、脂肪組織、結合組織、および筋肉) を除去することによって露出されます。 骨膜と皮質骨は骨切り術によって除去され、海綿状の骨が露出します。 ニューカッスル大学で前述したように、生検針を使用して、組織 VA 濃度と遺伝子発現を分析するために海綿骨からサンプルを採取します。

すべてのサンプルは、ドライアイスでニューカッスル大学に発送されます。

調査期間 INACIF から提供された情報によると、2013 年 3 月から 5 月の間に 18 人の剖検が 1 歳未満の子供に対して、24 人が 1 歳から 4 歳の子供に対して、11 人が 5 歳から 9 歳の子供に対して、51 人が10 ～ 14 歳、15 ～ 19 歳の青年では 281、20 ～ 24 歳の若者では 401 です。 INACIF の法医学者によると、グアテマラで行われた検死の総数の約 60% が首都で行われています。 9 歳未満の子供の主な死因は、頭部外傷とその他の外傷です。 10 歳から 24 歳までの個人が、銃器、刺し傷、窒息、さまざまな種類の外傷などの暴力が主な原因で死亡しました。