Zmírnění poruch souvisejících se syndromem polycystických vaječníků suplementací thymochinonu a metforminu

Tato randomizovaná klinická studie byla provedena na oddělení porodnictví a gynekologie v Saúdské německé nemocnici, Madinah-KSA, v období od února 2019 do srpna 2020. Do studie bylo zařazeno 207 pacientů, kteří splnili následující kritéria pro zařazení: věk 18 až 35 let, pacienti s nadváhou a obézní PCOS (nadváha definovaná jako index tělesné hmotnosti (BMI) 25-29,9 kg/m2 a obezita definovaná jako BMI ≥ 30 kg/m2) návštěva ambulance, stěžující si na amenoreu nebo oligomenoreu s nebo bez hirsutismu. Amenorea byla definována jako absence menstruace po dobu šesti nebo více měsíců. Oligomenorea byla definována jako interval cyklu delší než 35 dní, ale kratší než 6 měsíců. PCOS byla diagnostikována podle workshopu Rotterdam ESHRE/ASRM Consensus v roce 2004 s přítomností alespoň 2 ze 3 kritérií: oligo- a/nebo anovulace, klinický a/nebo biochemický hyperandrogenismus a morfologie polycystických ovarií identifikovaná ultrazvukem s více než 12 malé antrální folikuly ve vaječníku, s vyloučením dalších souvisejících etiologií, jako jsou nádory secernující androgeny, vrozená adrenální hyperplazie a hyperprolaktinémie. Byli zahrnuti pacienti s prediabetem, kteří mají zvýšené riziko rozvoje diabetu, jak je definováno Americkou diabetickou asociací 2014. Tito pacienti měli; zhoršená glukóza nalačno (IFG) definovaná jako hladina plazmatické glukózy nalačno (FPG) 100 až 125 mg/dl (půst byl popsán jako žádný kalorický příjem po dobu alespoň 8 hodin) nebo porucha glukózové tolerance (IGT) definovaná jako 2hodinové údaje 140 až 199 mg/dl v orálním glukózovém tolerančním testu (OGTT). Byli zahrnuti i pacienti, kteří byli podle Mezinárodní expertní komise z roku 2009 považováni za velmi rizikové z hlediska rozvoje diabetu. Tito pacienti měli hladiny glykosylovaného hemoglobinu A1C mezi 5,7 % a 6,4 %.

Kritéria vyloučení byla: štíhlá nebo průměrná hmotnost PCOS s BMI < 25 kg/m2, morbidně obézní pacienti s BMI ≥ 35 kg/m2, pacienti s jinými metabolickými poruchami, v anamnéze užívali jakoukoli hormonální léčbu nebo jakýkoli lék ovlivňující metabolismus sacharidů 3 měsíce před začátkem studie a neschopnost docházet na pravidelné následné návštěvy. Již známí a nedávno diagnostikovaní diabetici byli ze studie vyloučeni. Podle American Diabetes Association 2014 byl diabetes mellitus definován jako hladiny glykosylovaného hemoglobinu A1C ≥ 6,5 % nebo FPG ≥ 126 mg/dl nebo 2hodinové hodnoty glukózy v plazmě ≥ 200 mg/dl během 75 g OGTT nebo přítomnost klasických příznaků hyperglykémie s náhodnými hladinami glukózy v plazmě ≥ 200 mg/dl. Před účastí byla léčena onemocnění štítné žlázy a hyperprolaktinémie.

Studie byla v souladu s Helsinskou deklarací z roku 1964 a jejími pozdějšími dodatky. Protokol studie byl schválen místní etickou komisí. Všichni pacienti před účastí podepsali informovaný souhlas.

Během první rezervační návštěvy bylo provedeno úvodní posouzení s podrobným odběrem anamnézy, včetně osobní, lékařské, chirurgické, porodnické a menstruační anamnézy. Celkové vyšetření bylo provedeno s měřením BMI, obvodu pasu (WC), obvodu boků (HC) a poměru pas: boky (WHR).

BMI mělo tu nevýhodu, že nereprezentovalo skutečně distribuci tělesného tuku, a tedy povahu obezity, jak dospělo k závěru mnoha studií. Obvod pasu, obvod boků a poměr pas: boky byly tedy vybrány jako vhodnější měřítka abdominálního viscerálního tuku a tudíž důležité klinické markery pro predikci pacientů s rizikem rozvoje DM a kardiovaskulárních onemocnění.

Měření byla provedena podle protokolu STEPS 2008 Světové zdravotnické organizace (WHO). Obvod pasu byl měřen ve středu mezi spodním okrajem posledního hmatatelného žebra a vrcholem kyčelního hřebene. Obvod boků byl měřen kolem nejširší části hýždí. U obou měření byla páska upravena rovnoběžně s podlahou v úrovni, ve které bylo měření provedeno. Páska držela těsně kolem těla, ale nebyla tak pevně stažena. Pacient stál s nohama blízko u sebe, pažemi po stranách a tělesnou hmotností rovnoměrně rozloženou na chodidlech. Obvod pasu byl měřen na konci normálního výdechu, kdy jsou plíce na své funkční reziduální kapacitě. Protože mnoho jedinců nevědomě reaguje na měření pasu sáním své břišní stěny, bylo pacientům doporučeno, aby se před vlastním měřením uvolnili a udělali několik přirozených nádechů. Každé měření bylo opakováno dvakrát; pokud byla měření do 1 cm od sebe, vypočítal se průměr. Pokud rozdíl mezi dvěma měřeními přesáhl 1 cm, byla obě měření opakována.

Během návštěvy rezervace; byl proveden bazální pánevní ultrazvuk pro pacientky bez panny a transvaginální ultrazvuk (TVS) pro pacientky bez panny. Byly také odebrány vzorky krve pro OGTT, hladiny glykosylovaného hemoglobinu A1C, odhad aktivity SOD a koncentrace MDA.

Orální glukózový toleranční test (OGTT) byl proveden ráno po celonočním hladovění trvajícím alespoň 8 hodin za použití glukózové zátěže obsahující ekvivalent 75 gramů bezvodé glukózy rozpuštěné ve vodě. Rovněž byly měřeny hladiny glykosylovaného hemoglobinu A1C.

Pro odhad SOD aktivity byla provedena centrifugace krevních vzorků při 1000 g po dobu 10 minut, sérum bylo zmraženo a skladováno při -80 °C až do doby analýzy. Aktivita SOD byla založena na schopnosti enzymu inhibovat redukci nitrotetrazoliového barviva zprostředkovanou fenazinmethosulfátem. Purifikovaný SOD inhibuje počáteční rychlost redukce (O2 na O2-) zprostředkovanou aktivovaným fenazin-methosulfátem, který pak redukuje nitrotetrazoliovou modř. Poté bylo vypočteno procento inhibice a porovnáno se standardem 0,5 ug enzymu, který produkoval inhibici 80 % (aktivita = 3 000 jednotek/mg proteinu). Aktivita SOD byla nakonec vyjádřena jako jednotky enzymatické aktivity na mg proteinu obsaženého ve vzorcích (U/mg proteinu).

Koncentrace malondialdehydu (MDA) byly měřeny v µmol/litr pomocí derivatizace MDA s kyselinou thiobarbiturovou (TBA) na základě spektrofotometrického stanovení růžového fluorescenčního komplexu MDA-TBA vzniklého reakcí s kyselinou 2-thiobarbiturovou při vysoké teplotě a nízkém pH. Testovací soupravy pro MDA a SOD byly produkty (Cell Biolabs Inc, San Diego, USA).

Pacienti byli rozděleni do dvou skupin (A a B) pomocí počítačového softwaru Open Epi verze 3.21. Pacienti ve skupině A dostávali metformin 500 mg třikrát denně (5) s jídlem po dobu 6 měsíců (Metfor® 500 mg, tablety metformin hydrochloridu. TABUK Pharmaceutical. KSA). Pacienti ve skupině B dostávali kombinaci metforminu 500 mg třikrát denně s jídlem (Metfor® 500 mg, tablety metformin hydrochloridu. TABUK Pharmaceutical. KSA) a Thymoquinone (TQ) ve formě oleje z černého kmínu (Cumin Mar® Černý kmínový olej 500 mg měkké gelové kapsle, MARNYS. Španělsko) třikrát denně před jídlem po dobu 6 měsíců.

Pacienti byli instruováni, aby během období studie nedostávali žádný nestudovaný lék, aby zvýšili svou fyzickou aktivitu prováděním aerobního fyzického cvičení (střední úroveň po dobu dvou hodin a třicet minut týdně nebo intenzivní úroveň po dobu jedné hodiny a patnáct minut týdně) rozdělená do alespoň tři dny v týdnu a konzumovat nízkokalorickou stravu.

Všem pacientům bylo doporučeno, aby se dostavili na kontrolu po 3 a 6 měsících od začátku studie za účelem vyhodnocení jejich BMI, obvodu pasu, obvodu boků a poměru pas/boky a aby odebrali vzorek krve na OGTT, A1C, SOD aktivitu a koncentrace MDA. Pacientky byly také dotázány na svůj menstruační cyklus.

Primárními výsledky studie byly; obnovení pravidelných menstruačních cyklů, redukce hmotnosti zjištěná sníženým BMI, změna rozložení tělesného tuku prokázaná snížením poměru pas/boky, zlepšení glykemické kontroly, jak je dokumentováno normalizací OGTT a A1C a znovuzískání normální oxidační rovnováhy, jak bylo prokázáno sníženou koncentrací MDA a zvýšenou aktivitou SOD.