Förbättring av polycystiskt ovariesyndrom relaterade störningar genom tillskott av tymokinon och metformin

Denna randomiserade kliniska prövning genomfördes på avdelningen för obstetrik och gynekologi vid Saudi German Hospital, Madinah-KSA, under perioden februari 2019 till augusti 2020. Studien inkluderade 207 patienter som uppfyllde följande inklusionskriterier: ålder 18 till 35 år, överviktiga och feta PCOS-patienter (övervikt definierat som kroppsmassaindex (BMI) 25-29,9 kg/m2 och fetma definierad som BMI ≥ 30 kg/m2) som går på polikliniken, klagar på amenorré eller oligomenorré med eller utan hirsutism. Amenorré definierades som frånvaro av menstruation under sex eller fler månader. Oligomenorré definierades som ett cykelintervall på mer än 35 dagar men mindre än 6 månader. PCOS diagnostiserades enligt Rotterdam ESHRE/ASRM Consensus-workshop 2004, med närvaro av minst 2 av 3 kriterier: oligo- och/eller anovulering, klinisk och/eller biokemisk hyperandrogenism och polycystisk ovariemorfologi identifierad med ultraljud med mer än 12 små antralfolliklar i en äggstock, med uteslutning av andra relaterade etiologier som androgenutsöndrande tumörer, medfödd binjurehyperplasi och hyperprolaktinemi. Prediabetespatienter som löper ökad risk att utveckla diabetes, enligt definitionen av American Diabetes Association 2014, inkluderades. Dessa patienter hade; nedsatt fasteglukos (IFG) definierat som fasteplasmaglukosnivåer (FPG) på 100 till 125 mg/dL (fasta beskrevs som inget kaloriintag under minst 8 timmar), eller nedsatt glukostolerans (IGT) definierat som 2-timmarsavläsningar på 140 till 199 mg/dL i det orala glukostoleranstestet (OGTT). Patienter som ansågs ha mycket hög risk att utveckla diabetes enligt International Expert Committee 2009 inkluderades också. Dessa patienter hade sina glykosylerade hemoglobin A1C-nivåer mellan 5,7 % och 6,4 %.

Uteslutningskriterier var: magert eller medelvikt PCOS med BMI < 25 kg/m2, sjukligt överviktiga patienter med BMI ≥ 35 kg/m2, patienter som lider av andra metabola störningar, historia av att ha fått någon hormonbehandling eller något läkemedel som påverkar kolhydratmetabolismen 3 månader före studiens början och oförmåga att närvara vid de regelbundna uppföljningsbesöken. Redan kända och nyligen diagnostiserade diabetespatienter uteslöts från studien. Enligt American Diabetes Association 2014 definierades diabetes mellitus som glykosylerat hemoglobin A1C-nivåer ≥ 6,5 % eller FPG ≥ 126 mg/dL eller 2-timmars plasmaglukosvärden ≥ 200 mg/dL under 75 g OGTT, eller förekomst av klassiska symtom hyperglykemi med slumpmässiga plasmaglukosnivåer ≥ 200 mg/dL. Sköldkörtelsjukdomar och hyperprolaktinemi behandlades före deltagande.

Studien var i enlighet med Helsingforsdeklarationen 1964 och dess senare ändringar. Studieprotokollet godkändes av den lokala etiska kommittén. Alla patienter undertecknade ett informerat samtycke före deltagande.

Under det första bokningsbesöket gjordes en första bedömning med detaljerad anamnes, inklusive personlig, medicinsk, kirurgisk, obstetrisk och menstruationshistoria. Allmän undersökning gjordes med mätning av BMI, midjeomkrets (WC), höftomkrets (HC) och midja: höftkvot (WHR).

BMI hade nackdelen att inte riktigt representera kroppsfettfördelningen och därav överviktens natur, vilket många studier har kommit fram till. Så, midjeomkrets, höftomkrets och midja:höft-förhållande valdes som mer praktiska mått på bukfett och därmed viktiga kliniska markörer för att förutsäga patienter med risk att utveckla DM och hjärt-kärlsjukdomar.

Mätningar utfördes enligt Världshälsoorganisationens (WHO) STEPS-protokoll 2008. Midjeomkretsen mättes vid mittpunkten mellan den nedre kanten av det sista påtagliga revbenet och toppen av höftbenskammen. Höftomkretsen mättes runt den bredaste delen av skinkorna. För båda mätningarna justerades tejpen parallellt med golvet på den nivå vid vilken mätningen gjordes. Tejpen hölls tätt runt kroppen, men drogs inte så hårt. Patienten stod med fötterna tätt intill varandra, armarna vid sidorna och kroppsvikten jämnt fördelad över fötterna. Midjemåttet mättes i slutet av en normal utandning, när lungorna har sin funktionella restkapacitet. Eftersom många individer omedvetet reagerar på midjemått genom att suga på bukväggen, rekommenderades patienterna att slappna av och ta några naturliga andetag innan själva mätningen gjordes. Varje mätning upprepades två gånger; om mätningarna låg inom 1 cm från varandra, beräknades medelvärdet. Om skillnaden mellan de två måtten översteg 1 cm, upprepades de två mätningarna.

Under bokningsbesöket; ett basalt bäckenultraljud gjordes för oskuldsdeltagare och transvaginalt ultraljud (TVS) för icke-jungfrupatienter. Blodprover togs också för OGTT, glykosylerat hemoglobin A1C-nivåer, uppskattning av SOD-aktivitet och MDA-koncentrationer.

Det orala glukostoleranstestet (OGTT) utfördes på morgonen efter en natts fasta på minst 8 timmar, med användning av en glukosbelastning innehållande motsvarande 75 gram vattenfri glukos löst i vatten. Nivåer av glykosylerat hemoglobin A1C mättes också.

För uppskattning av SOD-aktivitet gjordes centrifugering av blodproverna vid 1000 g under 10 minuter, serumet frystes och förvarades vid -80°C fram till analystillfället. SOD-aktiviteten baserades på enzymets förmåga att hämma reduktionen av nitroblått tetrazoliumfärgämne förmedlat av fenazinmetosulfat. Den renade SOD hämmar den initiala reduktionshastigheten av (O2 till O2-) förmedlad av det aktiverade fenazinmetosulfatet som sedan reducerar nitroblåttetrazoliumet. Procentandelen hämning beräknades sedan och jämfördes med standarden på 0,5 μg av enzymet som gav hämning på 80 % (aktivitet = 3 000 enheter/mg protein). SOD-aktiviteten uttrycktes slutligen som enheter av enzymatisk aktivitet per mg protein som fanns i proverna (U/mg protein).

Koncentrationer av malondialdehyd (MDA) mättes i µmol/liter med användning av derivatiserings-MDA med tiobarbitursyra (TBA) baserat på spektrofotometrisk bestämning av rosa fluorescerande MDA-TBA-komplex producerat efter reaktion med 2-tiobarbitursyra vid hög temperatur och lågt pH. Analyssatserna för MDA och SOD var produkter från (Cell Biolabs Inc, San Diego, USA).

Patienterna delades in i två grupper (A och B) med hjälp av en datorbaserad programvara Open Epi version 3.21. Patienter i grupp A fick Metformin 500 mg tre gånger dagligen (5) med måltid i 6 månader (Metfor® 500 mg, Metforminhydrokloridtabletter. TABUK Pharmaceutical. KSA). Patienter i grupp B fick en kombination av Metformin 500 mg tre gånger dagligen med måltider (Metfor® 500 mg, Metforminhydrokloridtabletter. TABUK Pharmaceutical. KSA) och Thymoquinone (TQ) i form av Black Cumin oil (Cumin Mar® Black cumin oil 500 mg mjuka gelkapslar, MARNYS. Spanien) tre gånger dagligen före måltid i 6 månader.

Patienterna instruerades att inte få något icke-studieläkemedel under studieperioden, att öka sin fysiska aktivitet genom att utföra aerob fysisk träning (måttlig nivå i två timmar och trettio minuter i veckan eller kraftig nivå i en timme och femton minuter i veckan) fördelat på kl. minst tre dagar i veckan och att äta en lågkaloridiet.

Alla patienter rekommenderades att närvara för uppföljning efter 3 och 6 månader från början av studien för utvärdering av deras BMI, midjemått, höftomkrets och midje/höftförhållande och att ta ett blodprov för OGTT, A1C, SOD-aktivitet och MDA-koncentration. Patienterna tillfrågades också om deras menstruationscykelmönster.

De primära studieresultaten var; återupptagandet av regelbundna menstruationscykler, viktminskning som detekterats av minskat BMI, förändring av kroppsfettsfördelning som bevisats av minskat midja/höftförhållande, förbättring av den glykemiska kontrollen som dokumenterats genom normalisering av OGTT och A1C och återfå den normala oxidativa balansen som bevisats genom minskad MDA-koncentration och ökad SOD-aktivitet.