Miglioramento dei disturbi correlati alla sindrome dell'ovaio policistico mediante integrazione di timochinone e metformina

Questo studio clinico randomizzato è stato condotto nel dipartimento di ostetricia e ginecologia presso l'ospedale tedesco saudita, Madinah-KSA, nel periodo da febbraio 2019 ad agosto 2020. Lo studio ha incluso 207 pazienti che soddisfacevano i seguenti criteri di inclusione: età compresa tra 18 e 35 anni, pazienti con PCOS in sovrappeso e obesi (sovrappeso definito come indice di massa corporea (BMI) 25-29,9 kg/m2 e obesità definita come BMI ≥ 30 kg/m2) che frequentano l'ambulatorio, lamentando amenorrea o oligomenorrea con o senza irsutismo. L'amenorrea è stata definita come assenza di mestruazioni per sei o più mesi. L'oligomenorrea è stata definita come intervallo del ciclo superiore a 35 giorni ma inferiore a 6 mesi. La PCOS è stata diagnosticata secondo il Rotterdam ESHRE/ASRM Consensus workshop del 2004, con la presenza di almeno 2 criteri su 3: oligo- e/o anovulazione, iperandrogenismo clinico e/o biochimico e morfologia dell'ovaio policistico identificata mediante ecografia con più di 12 piccoli follicoli antrali in un ovaio, con esclusione di altre eziologie correlate come tumori che secernono androgeni, iperplasia surrenale congenita e iperprolattinemia. Sono stati inclusi i pazienti prediabetici a maggior rischio di sviluppare il diabete, come definito dall'American Diabetes Association 2014. Quei pazienti avevano; alterata glicemia a digiuno (IFG) definita come livelli di glicemia plasmatica a digiuno (FPG) da 100 a 125 mg/dL (il digiuno è stato descritto come assenza di apporto calorico per almeno 8 ore) o alterata tolleranza al glucosio (IGT) definita come letture di 2 ore da 140 a 199 mg/dL nel test di tolleranza al glucosio orale (OGTT). Sono stati inclusi anche i pazienti considerati ad altissimo rischio di sviluppare il diabete secondo l'International Expert Committee 2009. Quei pazienti avevano i loro livelli di emoglobina glicosilata A1C tra il 5,7% e il 6,4%.

I criteri di esclusione erano: PCOS magra o di peso medio con BMI < 25 kg/m2, pazienti patologicamente obesi con BMI ≥ 35 kg/m2, pazienti affetti da qualsiasi altro disturbo metabolico, storia di trattamento ormonale o farmaco che influenza il metabolismo dei carboidrati 3 mesi prima dell'inizio dello studio e incapacità di partecipare alle regolari visite di follow-up. Sono stati esclusi dallo studio i pazienti diabetici già noti e di recente diagnosi. Secondo l'American Diabetes Association 2014, il diabete mellito è stato definito come livelli di emoglobina glicosilata A1C ≥ 6,5% o FPG ≥ 126 mg/dL o letture della glicemia a 2 ore ≥ 200 mg/dL durante 75 g OGTT, o presenza di sintomi classici di iperglicemia con livelli casuali di glucosio plasmatico ≥ 200 mg/dL. Le malattie della tiroide e l'iperprolattinemia sono state trattate prima della partecipazione.

Lo studio era conforme alla dichiarazione di Helsinki del 1964 e ai successivi emendamenti. Il protocollo di studio è stato approvato dal comitato etico locale. Tutti i pazienti hanno firmato un consenso informato prima della partecipazione.

Durante la prima visita di prenotazione, è stata effettuata una valutazione iniziale con anamnesi dettagliata, compresa la storia personale, medica, chirurgica, ostetrica e mestruale. L'esame generale è stato eseguito con la misurazione del BMI, della circonferenza della vita (WC), della circonferenza dell'anca (HC) e del rapporto vita: fianchi (WHR).

Il BMI aveva lo svantaggio di non rappresentare veramente la distribuzione del grasso corporeo e quindi la natura dell'obesità, come concluso da molti studi. Quindi, la circonferenza della vita, la circonferenza dell'anca e il rapporto vita:fianchi sono stati selezionati come misure più convenienti del grasso viscerale addominale e quindi importanti marcatori clinici per prevedere i pazienti a rischio di sviluppare DM e malattie cardiovascolari.

Le misurazioni sono state effettuate secondo il protocollo STEPS 2008 dell'Organizzazione mondiale della sanità (OMS). La circonferenza della vita è stata misurata nel punto medio tra il margine inferiore dell'ultima costola palpabile e la sommità della cresta iliaca. La circonferenza dell'anca è stata misurata intorno alla parte più ampia dei glutei. Per entrambe le misurazioni, il nastro è stato regolato parallelamente al pavimento al livello in cui è stata effettuata la misurazione. Il nastro era ben stretto attorno al corpo, ma non così stretto. Il paziente era in piedi con i piedi ravvicinati, le braccia lungo i fianchi e il peso corporeo uniformemente distribuito sui piedi. La circonferenza vita è stata misurata al termine di una normale espirazione, quando i polmoni sono alla loro capacità funzionale residua. Poiché molti individui reagiscono inconsciamente alla misurazione della vita succhiando la parete addominale, ai pazienti è stato consigliato di rilassarsi e fare alcuni respiri naturali prima che fosse effettuata la misurazione effettiva. Ogni misurazione è stata ripetuta due volte; se le misurazioni erano entro 1 cm l'una dall'altra, veniva calcolata la media. Se la differenza tra le due misurazioni superava 1 cm, le due misurazioni venivano ripetute.

Durante la visita di prenotazione; un'ecografia pelvica basale è stata eseguita per i partecipanti vergini e l'ecografia transvaginale (TVS) per i pazienti non vergini. Sono stati raccolti anche campioni di sangue per OGTT, livelli di emoglobina glicosilata A1C, stima dell'attività SOD e concentrazioni di MDA.

Il test orale di tolleranza al glucosio (OGTT) è stato eseguito al mattino dopo un digiuno notturno di almeno 8 ore, utilizzando un carico di glucosio contenente l'equivalente di 75 grammi di glucosio anidro sciolto in acqua. Sono stati misurati anche i livelli di emoglobina glicosilata A1C.

Per la stima dell'attività SOD, i campioni di sangue sono stati centrifugati a 1000 g per 10 minuti, il siero è stato congelato e conservato a -80°C fino al momento dell'analisi. L'attività della SOD era basata sulla capacità dell'enzima di inibire la riduzione del colorante nitro blu tetrazolio mediata dal metosolfato di fenazina. La SOD purificata inibisce la velocità iniziale di riduzione di (da O2 a O2-) mediata dal metosolfato di fenazina attivato che quindi riduce il tetrazolio blu nitro. La percentuale di inibizione è stata quindi calcolata e confrontata con lo standard di 0,5 μg dell'enzima che ha prodotto un'inibizione dell'80% (attività = 3.000 unità/mg proteina). L'attività SOD è stata infine espressa come unità di attività enzimatica per mg di proteina contenuta nei campioni (U/mg proteina).

Le concentrazioni di malondialdeide (MDA) sono state misurate in µmol/litro utilizzando la derivatizzazione MDA con acido tiobarbiturico (TBA) basata sulla determinazione spettrofotometrica del complesso MDA-TBA fluorescente rosa prodotto dopo la reazione con acido 2-tiobarbiturico ad alta temperatura e basso pH. I kit di analisi per MDA e SOD erano prodotti da (Cell Biolabs Inc, San Diego, USA).

I pazienti sono stati divisi in due gruppi (A e B) utilizzando un software basato su computer Open Epi versione 3.21. I pazienti del gruppo A hanno ricevuto metformina 500 mg tre volte al giorno (5) ai pasti per 6 mesi (Metfor® 500 mg, compresse di metformina cloridrato. TABUK Farmaceutico. KSA). I pazienti del gruppo B hanno ricevuto una combinazione di metformina 500 mg tre volte al giorno durante i pasti (Metfor® 500 mg, compresse di metformina cloridrato. TABUK Farmaceutico. KSA) e timochinone (TQ) sotto forma di olio di cumino nero (Cumin Mar® Olio di cumino nero 500 mg capsule di gel morbido, MARNYS. Spagna) tre volte al giorno prima dei pasti per 6 mesi.

I pazienti sono stati istruiti a non ricevere alcun farmaco non in studio durante il periodo di studio, ad aumentare la loro attività fisica eseguendo esercizio fisico aerobico (livello moderato per due ore e trenta minuti settimanali o livello vigoroso per un'ora e quindici minuti settimanali) suddiviso in almeno tre giorni alla settimana e consumare una dieta ipocalorica.

A tutti i pazienti è stato consigliato di partecipare al follow-up dopo 3 e 6 mesi dall'inizio dello studio per la valutazione del loro BMI, circonferenza della vita, circonferenza dell'anca e rapporto vita/fianchi e di prelevare un campione di sangue per OGTT, A1C, attività SOD e concentrazione di MDA. Ai pazienti è stato anche chiesto del loro ciclo mestruale.

I risultati primari dello studio erano; la ripresa dei cicli mestruali regolari, la riduzione del peso come rilevato dalla diminuzione del BMI, il cambiamento della distribuzione del grasso corporeo come dimostrato dalla riduzione del rapporto vita/fianchi, il miglioramento del controllo glicemico come documentato dalla normalizzazione di OGTT e A1C e il recupero del normale equilibrio ossidativo come evidenziato dalla diminuzione della concentrazione di MDA e dall'aumentata attività della SOD.