Nové perspektivy v patogenezi adenomyózy s epigenetickou analýzou a miRNA (ADENO-MIRNA)

Tato studie je založena na předchozím výzkumu poukazujícím na to, že cirkulující miRNA jsou abnormálně exprimovány v několika patologiích včetně endometriózy a mohou být použity jako praktický diagnostický nástroj v klinickém prostředí. Předpokládáme, že miRNA jsou odlišně exprimovány i u adenomyózy a mohly by sloužit jako neinvazivní biomarkery k diagnostice stavu. Abychom tuto hypotézu ověřili, plánujeme provést pilotní studii na 50 pacientech (25 pacientů s adenomyózou a 25 zdravých subjektů), abychom porovnali expresi různých miRNA mezi skupinami a určili vhodný diagnostický panel. Na ČZU je v průběhu roku přibližně 25 žen podstupujících hysterektomii pro adenomyózu. Je to také nezbytná populace pro získání statisticky analyzovatelných dat. Tento panel může být v budoucnu testován na větší populaci pro účely ověření.

Vzorky krve (10 ml) odebere v den operace anesteziolog pacientkám navštěvujícím ČZU za účelem hysterektomie. Pacientky budou rozděleny do dvou skupin, a to na studijní skupinu (n=25) zahrnující pacientky s diagnózou adenomyózy pomocí MRI a/nebo ultrasonografie před operací a kontrolní skupinu (n=25) složenou z pacientek s patologiemi nesouvisejícími s endometriem. Po registraci vzorků do biobanky ČZU budou vzorky převezeny do výzkumné laboratoře a sérum bude ihned odebráno centrifugací při 2500 ot./min po dobu 15 minut při 4°C a následným skladováním při -80°C do dalšího použití. K izolaci cirkulujících miRNA se použije komerční kit (Qiagen miRNeasy sérum/plazma kit) a cDNA se poté syntetizuje pomocí vhodného kitu (Qiagen miScript II RT). Komerční sady miRNA budou použity k současné kvantifikaci exprese přibližně 1000 miRNA a porovnání jejich expresních profilů mezi pacienty s adenomyózou a nepostiženými subjekty. Poté budou provedeny jednotlivé reakce RT-qPCR k ověření výsledků. Diferenciálně exprimované mikroRNA v adenomyóze budou dále analyzovány za účelem stanovení jejich cílových genů a následně ovlivněných biologických funkcí pomocí vhodných databází (TargetScan a miRTarBase). Tento experimentální přístup nám umožní identifikovat abnormálně exprimované miRNA u adenomyózy ve srovnání s ženami bez onemocnění. Ty pak mohou být použity jako neinvazivní biomarkery patologie a/nebo cílené pro vývoj nových terapeutických možností.