Nowe perspektywy w patogenezie adenomiozy z analizą epigenetyczną i miRNA (ADENO-MIRNA)

Niniejsze badanie opiera się na wcześniejszych badaniach, które wykazały, że krążące miRNA ulegają nieprawidłowej ekspresji w przypadku kilku patologii, w tym endometriozy, i mogą być stosowane jako poręczne narzędzie diagnostyczne w warunkach klinicznych. Stawiamy hipotezę, że miRNA ulegają zróżnicowanej ekspresji również w adenomiozie i mogą służyć jako nieinwazyjne biomarkery do diagnozowania choroby. Aby przetestować tę hipotezę, planujemy przeprowadzić badanie pilotażowe na 50 pacjentach (25 pacjentów z adenomiozą i 25 zdrowych osób), aby porównać ekspresję różnych miRNA w grupach i określić odpowiedni panel diagnostyczny. W CUSL około 25 kobiet poddaje się w ciągu roku histerektomii z powodu adenomiozy. Jest to także populacja niezbędna do uzyskania danych analizowalnych statystycznie. Panel ten może zostać w przyszłości przetestowany na większej populacji w celach walidacyjnych.

Próbki krwi (10 ml) będą pobierane przez anestezjologa w dniu zabiegu od pacjentek zgłaszających się do CUSL w celu histerektomii. Pacjentki zostaną podzielone na dwie grupy, a mianowicie grupę badaną (n=25) obejmującą pacjentki, u których przed operacją zdiagnozowano adenomiozę w badaniu MRI i/lub USG oraz grupę kontrolną (n=25) składającą się z pacjentek z patologiami niezwiązanymi z endometrium. Po zarejestrowaniu próbek w biobanku CUSL zostaną one przekazane do laboratorium badawczego i niezwłocznie pobrana zostanie surowica poprzez odwirowanie przy 2500 obr./min przez 15 min w temperaturze 4°C, a następnie przechowywanie w temperaturze -80°C do dalszego wykorzystania. W celu wyizolowania krążących miRNA zostanie zastosowany komercyjny zestaw (zestaw Qiagen miRNeasy surowica/osocze), a następnie zostanie zsyntetyzowany cDNA przy użyciu odpowiedniego zestawu (Qiagen miScript II RT). Komercyjne macierze miRNA zostaną wykorzystane do jednoczesnego określenia ilościowego ekspresji około 1000 miRNA i porównania ich profili ekspresji u pacjentów z adenomiozą i osób zdrowych. Następnie zostaną przeprowadzone indywidualne reakcje RT-qPCR w celu potwierdzenia wyników. MikroRNA ulegające zróżnicowanej ekspresji w adenomiozie będą dalej analizowane w celu określenia ich docelowych genów i późniejszych funkcji biologicznych, na które mają one wpływ, przy użyciu odpowiednich baz danych (TargetScan i miRTarBase). To eksperymentalne podejście pozwoli nam zidentyfikować miRNA ulegające nieprawidłowej ekspresji w adenomiozie w porównaniu z kobietami wolnymi od choroby. Można je następnie wykorzystać jako nieinwazyjne biomarkery patologii i/lub ukierunkować na opracowanie nowych opcji terapeutycznych.