Nuove prospettive nella patogenesi dell'adenomiosi con l'analisi epigenetica e i miRNA (ADENO-MIRNA)

Il presente studio si basa su ricerche precedenti che sottolineano che i miRNA circolanti sono espressi in modo anomalo in diverse patologie tra cui l'endometriosi e possono essere utilizzati come utile strumento diagnostico in ambito clinico. Ipotizziamo che i miRNA siano espressi in modo differenziale anche nell'adenomiosi e potrebbero servire come biomarcatori non invasivi per diagnosticare la condizione. Per testare questa ipotesi, intendiamo condurre uno studio pilota su 50 pazienti (25 pazienti con adenomiosi e 25 soggetti sani), al fine di confrontare l'espressione di diversi miRNA tra i gruppi e determinare un pannello diagnostico adeguato. Sono circa 25 le donne che nell'arco di un anno vengono sottoposte ad isterectomia per adenomiosi al CUSL. È anche una popolazione necessaria per ottenere dati statisticamente analizzabili. Questo pannello potrebbe essere testato in futuro su una popolazione più ampia a fini di validazione.

Il giorno dell'intervento l'anestesista preleverà campioni di sangue (10 ml) dalle pazienti visitate al CUSL per l'isterectomia. I pazienti saranno suddivisi in due gruppi, vale a dire il gruppo di studio (n=25) comprendente pazienti con diagnosi di adenomiosi mediante risonanza magnetica e/o ecografia precedente ad intervento chirurgico e il gruppo di controllo (n=25) costituito da pazienti con patologie non correlate all'endometrio. Dopo la registrazione dei campioni nella biobanca CUSL, questi verranno trasferiti al laboratorio di ricerca e il siero verrà raccolto immediatamente mediante centrifugazione a 2500 giri/min per 15 minuti a 4° C seguita da conservazione a -80° C fino ad ulteriore utilizzo. Per isolare i miRNA circolanti, verrà utilizzato un kit commerciale (kit Qiagen miRNeasy siero/plasma) e il cDNA verrà quindi sintetizzato utilizzando il kit appropriato (Qiagen miScript II RT). Verranno utilizzati array di miRNA commerciali per quantificare simultaneamente l'espressione di circa 1000 miRNA e confrontare i loro profili di espressione tra pazienti con adenomiosi e soggetti non affetti. Verranno quindi condotte reazioni individuali RT-qPCR per convalidare i risultati. I microRNA differenzialmente espressi nell'adenomiosi saranno ulteriormente analizzati per determinare i loro geni bersaglio e le conseguenti funzioni biologiche interessate, utilizzando database appropriati (TargetScan e miRTarBase). Questo approccio sperimentale ci consentirà di identificare miRNA espressi in modo anomalo nell'adenomiosi rispetto alle donne sane. Questi possono poi essere utilizzati come biomarcatori non invasivi della patologia e/o mirati allo sviluppo di nuove opzioni terapeutiche.