Neue Perspektiven in der Adenomyosis-Pathogenese mit epigenetischer Analyse und miRNAs (ADENO-MIRNA)

Die vorliegende Studie basiert auf früheren Forschungsergebnissen, die darauf hinweisen, dass zirkulierende miRNAs bei verschiedenen Pathologien, einschließlich Endometriose, abnormal exprimiert werden und als praktisches Diagnoseinstrument im klinischen Umfeld eingesetzt werden können. Wir nehmen an, dass miRNAs auch bei Adenomyose unterschiedlich exprimiert werden und als nichtinvasive Biomarker zur Diagnose der Erkrankung dienen könnten. Um diese Hypothese zu testen, planen wir die Durchführung einer Pilotstudie an 50 Patienten (25 Adenomyose-Patienten und 25 gesunde Probanden), um die Expression verschiedener miRNAs zwischen den Gruppen zu vergleichen und ein geeignetes diagnostisches Panel zu bestimmen. An der CUSL werden im Laufe eines Jahres etwa 25 Frauen einer Hysterektomie wegen Adenomyose unterzogen. Es handelt sich außerdem um eine notwendige Grundgesamtheit, um statistisch auswertbare Daten zu erhalten. Dieses Panel könnte in Zukunft zu Validierungszwecken in einer größeren Population getestet werden.

Am Tag der Operation werden vom Anästhesisten Blutproben (10 ml) von Patientinnen entnommen, die das CUSL zum Zwecke der Hysterektomie aufsuchen. Die Patienten werden in zwei Gruppen unterteilt, nämlich die Studiengruppe (n=25), die Patienten umfasst, bei denen vor der Operation mittels MRT und/oder Ultraschall eine Adenomyose diagnostiziert wurde, und die Kontrollgruppe (n=25), die aus Patienten mit Pathologien besteht, die nichts mit dem Endometrium zu tun haben. Nach der Probenregistrierung in der CUSL-Biobank werden sie an das Forschungslabor übertragen und das Serum wird sofort durch Zentrifugieren bei 2500 U/min für 15 Minuten bei 4 °C und anschließende Lagerung bei -80 °C bis zur weiteren Verwendung gesammelt. Um zirkulierende miRNAs zu isolieren, wird ein kommerzielles Kit (Qiagen miRNeasy Serum/Plasma-Kit) verwendet und die cDNA wird dann mit einem geeigneten Kit (Qiagen miScript II RT) synthetisiert. Kommerzielle miRNA-Arrays werden verwendet, um die Expression von etwa 1000 miRNAs gleichzeitig zu quantifizieren und ihre Expressionsprofile zwischen Adenomyose-Patienten und nicht betroffenen Probanden zu vergleichen. Anschließend werden einzelne RT-qPCR-Reaktionen durchgeführt, um die Ergebnisse zu validieren. Differenziell exprimierte microRNAs bei Adenomyose werden mithilfe geeigneter Datenbanken (TargetScan und miRTarBase) weiter analysiert, um ihre Zielgene und die daraus resultierenden betroffenen biologischen Funktionen zu bestimmen. Dieser experimentelle Ansatz wird es uns ermöglichen, abnormal exprimierte miRNAs bei Adenomyose im Vergleich zu krankheitsfreien Frauen zu identifizieren. Diese können dann als nichtinvasive Biomarker der Pathologie und/oder gezielt für die Entwicklung neuer Therapieoptionen verwendet werden.