Новые перспективы патогенеза аденомиоза с помощью эпигенетического анализа и микроРНК (ADENO-MIRNA)

Настоящее исследование основано на предыдущих исследованиях, указывающих на то, что циркулирующие микроРНК аномально экспрессируются при некоторых патологиях, включая эндометриоз, и могут использоваться в качестве удобного диагностического инструмента в клинических условиях. Мы предполагаем, что микроРНК также дифференциально экспрессируются при аденомиозе и могут служить неинвазивными биомаркерами для диагностики этого состояния. Чтобы проверить эту гипотезу, мы планируем провести пилотное исследование на 50 пациентах (25 больных аденомиозом и 25 здоровых субъектах), чтобы сравнить экспрессию различных микроРНК между группами и определить подходящую диагностическую панель. Примерно 25 женщин переносят гистерэктомию по поводу аденомиоза в течение года в CUSL. Это также необходимая совокупность для получения статистически анализируемых данных. Эта панель может быть протестирована в будущем на большей популяции в целях проверки.

Образцы крови (10 мл) будут взяты анестезиологом в день операции у пациенток, посещающих CUSL, с целью гистерэктомии. Пациентки будут разделены на две группы: основную группу (n=25), включающую пациентов с диагнозом аденомиоза по данным МРТ и/или УЗИ до операции, и контрольную группу (n=25), состоящую из пациенток с патологиями, не связанными с эндометрием. После регистрации образцов в биобанке CUSL они будут переданы в исследовательскую лабораторию, и сыворотка будет немедленно собрана центрифугированием при 2500 об/мин в течение 15 мин при 4°С с последующим хранением при -80°С до дальнейшего использования. Для выделения циркулирующих микроРНК будет использоваться коммерческий набор (набор сыворотки/плазмы Qiagen miRNeasy), а затем кДНК будет синтезирована с использованием соответствующего набора (Qiagen miScript II RT). Коммерческие массивы микроРНК будут использоваться для одновременной количественной оценки экспрессии около 1000 микроРНК и сравнения профилей их экспрессии у пациентов с аденомиозом и здоровых субъектов. Затем будут проведены отдельные реакции RT-qPCR для проверки результатов. Дифференциально экспрессируемые при аденомиозе микроРНК будут дополнительно проанализированы для определения их генов-мишеней и последующих затронутых биологических функций с использованием соответствующих баз данных (TargetScan и miRTarBase). Этот экспериментальный подход позволит нам идентифицировать аномально экспрессируемые микроРНК при аденомиозе по сравнению с женщинами, здоровыми. Затем их можно использовать в качестве неинвазивных биомаркеров патологии и/или для разработки новых терапевтических вариантов.