Koncentrace prozánětlivých a protizánětlivých cytokinů a metalopeptidáz v séru při léčbě bolesti způsobené vyboulením meziobratlové ploténky v bederní páteři

Místem výzkumu je Ústav pro léčbu bolesti na Klinice anesteziologie, reanimatologie a intenzivní medicíny, Klinické nemocniční centrum Osijek, dále Laboratoř translační medicíny Fakulty zubního lékařství a zdravotnictví Osijek. Výzkum je koncipován jako nerandomizovaný kontrolovaný experiment a délka výzkumu bude záviset na dostupném počtu pacientů splňujících kritéria pro zařazení do uvedeného výzkumu a vzhledem k očekávanému přílivu pacientů je plánovaná doba trvání 18 měsíců. .

Všichni pacienti obdrží písemný informovaný souhlas a postup bude ústně vysvětlen. Po podepsání informovaného souhlasu budou pacienti rozděleni do dvou skupin. Jedna skupina pacientů podstoupí epidurální aplikaci steroidů a lokálního anestetika transforaminálním přístupem a druhá skupina pacientů podstoupí konzervativní metodu léčby bolesti. Všechny předměty budou vybírány v Institutu pro léčbu bolesti KBC Osijek. Níže jsou uvedena kritéria pro zařazení a vyloučení pacientů do této studie.

Nahlížením do zdravotnické dokumentace budou respektována veškerá etická a morální práva respondentů se zvláštním zřetelem na osobní údaje respondentů, které budou anonymní. Předměty budou shromažďovány v Centru klinické nemocnice Osijek - Klinice anesteziologie, reanimace a intenzivní péče v Institutu pro léčbu bolesti. Pacienti, kteří splňují kritéria pro zařazení do výzkumu, budou vyzváni k účasti ve výzkumu a bude jim to vysvětleno ústně i písemně pomocí informačního formuláře pro subjekty. Po podepsání informovaného souhlasu budou pacienti zašifrováni pro ochranu dat a identity.

V určený den budou požádáni o vyplnění dotazníku (ODI, PSQI, SF-36, MCGill short, HAQ, painDETECT), následně umožnění odběru krve, a fyzioterapeutické posouzení - rozsah pohyblivosti (goniometrie), měření cirkularity, a Time up and go testy. Test vsedě, test Adams Forward Bend, test Lasegue, test chůze na špičkách, test chůze na patě a test vzdálenosti mezi špičkou a podlahou. Výše uvedené fyzioterapeutické testy se používají při standardním hodnocení pacientů.

Pacienti budou vyzváni k vyplnění dotazníku při kontrolním vyšetření, na konci terapie a při dalším kontrolním vyšetření, po 3 měsících.

První a kontrolní vyšetření provede kompetentní lékař, specialista. Odběr krve bude proveden podle kontroly v Centru klinické nemocnice v Osijeku, pokud kontrola nebude naplánována, a pro výzkumné účely bude proveden v Mursa Medical Center. Z laboratorních nálezů budou měřeny leukocyty, C-reaktivní protein (CRP) a diferenciální krevní obraz (DKS) a hladiny cytokinů.

Vzorky krve pro analýzu budou odebírány do zkumavek s červeným uzávěrem, které budou skladovány při +4 až do centrifugace v Laboratoři translační medicíny Fakulty zubního lékařství a zdravotnictví Osijek. Vzorek bude centrifugován při 1000 rcf/10 min a poté bude sérum rozděleno na alikvoty do samostatných sterilních testovacích zkumavek a skladováno v chladničce při -80 °C až do laboratorní analýzy. Pro multikomplexní kvantitativní analýzu protizánětlivých cytokinů, interferonu gama, tumor nekrotizujícího faktoru alfa, chemokinového ligandu a matrixových metaloproteináz budou použity zakázkové ProcartaPlex Multiplex testy (eBioscience, Affymetrix), jejichž princip je založen na kuličkách pro kvantifikaci proteinů podle principu Sedwich ELISA test s použitím Luminex® xMAP® (multi-analyte profiling) Celý protokol bude proveden podle pokynů výrobce eBioscience. Destička bude načtena v zařízení Luminex® xMAP®. Hladina testovaných analytů bude stanovena pomocí softwaru ProcartaPlex Analyst v1.0. eBioscience, Affymetrix).

Pro výpočet odpovídajícího počtu respondentů budou aplikovány statistické metody následovně: - pro pozorování středního efektu (f = 0,25) v rozdílu spojitých proměnných mezi třemi měřeními ve dvou skupinách subjektů, celková minimální požadovaná velikost vzorku je 44 subjekty - pozorovat střední efekt (d = 0,5) v rozdílu spojitých proměnných mezi dvěma skupinami subjektů, s hladinou významnosti 0,05 a mocninou 0,80, minimální požadovaná velikost vzorku je 128 subjektů. Závěrem lze konstatovat, že minimální velikost vzorku ve výzkumu je 128 respondentů (G*Power, 3.1.2).

Číselná data budou popsána aritmetickým průměrem a směrodatnou odchylkou a v případě rozdělení, která nesledují normální rozdělení, mediánem a mezikvartilovým rozmezím. Rozdíly mezi dvěma nezávislými skupinami normálně rozdělených číselných dat budou testovány Studentovým T-testem, v případě, že proměnné nesledují normální rozdělení, bude použit neparametrický analog (Man-Whitney U test). Statistická analýza bude provedena pomocí programu Statistica 10.0 (StatSoft, Tulsa, OK, USA), s vybranou hladinou významnosti α=0,05.