Účinky na hladiny cytokinů IL-1ß, IL-4, TNF-α a orální mikroflóru kompozice obsahující olivový olej, betain a xylitol dodávané jako denní zubní pasta.

Integrita bariéry hraje klíčovou roli v homeostáze vrozeného imunitního systému. Tyto bariéry, jejich buňky a sítě, když jsou neporušené a obývají je eubiotický mikrobiom, regulují imunitu a zánět, udržují tělo ve stavu homeostázy a rovnováhy s výsledkem zdraví.

Vnější tlak na sliznici a kožní bariéry ze strany cizích látek a okolních podmínek poskytuje měnící se půdu pro expresi prozánětlivých cytokinů vedoucí k tomu, co je dnes známé jako metabolická infekce a systémový zánět. Udržovaný tlak může převýšit kontrolní mechanismy imunitního systému, což vede k neřízenému uvolňování různých prozánětlivých cytokinů, jako je IL-1ß a TNF-α, které dále přispějí k porušení bariéry a ke stavu imunitní dysregulace a zánětu. Naopak, IL-4 byly připisovány jak protizánětlivé, tak prozánětlivé vlastnosti.

Parodontální zánět, druhý nejčastější přispěvatel k systémové zánětlivé zátěži hned za obezitou, je důležitým faktorem zvyšujícím regulaci prozánětlivých cytokinů ve slinách a nabízí praktický model pro řešení složitého přeslechu mezi zánětem a chronickými zánětlivými onemocněními.

NÁVRH STUDIE Současná studie bude randomizovanou kontrolovanou studií u pacientů s nelehkou parodontózou plánovanou na rutinní návštěvu na University of Barcelona (UB), Dental Hospital Barcelona University (HOUB), Bellvitge Campus.

Randomizace a maskování Pacienti budou náhodně přiřazováni pomocí sekvence náhodného přiřazení generované pomocí Microsoft Office Excel 2019 (Microsoft Corporation, Washington, USA, 2013). Rozdělení 1:1 bude použito k přiřazení účastníků buď do intervenční skupiny (IG) nebo kontrolní skupiny (CG).

Intervenční skupina bude používat experimentální zubní pastu obsahující novou kompozici obsahující olivový olej, betain a xylitol. Kontrolní skupina bude používat placebo zubní pastu. Pomocné látky budou společné pro obě skupiny. Všechny produkty budou baleny v bílých tubách se štítkem, na kterém bude uvedeno číslo pacienta. Informace o produktu přidělené každému pacientovi budou umístěny v zapečetěné obálce, která bude obsahovat výhradně přidělené číslo pacienta, aby byla zachována integrita procesu zaslepení. Účastníci i operátoři budou pro přiřazení maskováni.

Intervence Účastníci z obou skupin budou navštěvováni na zubní klinice na začátku a na konci studie. Během první návštěvy budou obnovena základní data. Závěrečná návštěva se uskuteční po jednom měsíci pro konečný sběr dat.

I. První návštěva (T0):

Pacienti budou informováni o podrobnostech studie. Údaje o pohlaví a věku budou získány z anamnézy. Nebude prováděno žádné parodontologické ošetření, hygiena ani profilaxe, aby nedošlo ke změně subgingivální mikroflóry. Budou obnovena následující data:

• Vyšetření ústní sliznice
• Index zkažených, chybějících a plněných zubů (DMFT).
• Index O'Learyho plaku
• Základní periodontální vyšetření: Hloubka sondy a ztráta klinického úponu
• Sialometrie: Měřil se nestimulovaný a stimulovaný tok slin.
• pH slin K analýze cytokinů budou použity nestimulované sliny. Vzorky budou odebírány pomocí sterilních papírových hrotů vložených do gingiválního sulku alespoň tří zubů, nejlépe z 16, 22, 41, 47 pro mikrobiální analýzu.

Bude zaznamenána váha a výška účastníka a vypočítán index tělesné hmotnosti (BMI), aby bylo možné účastníky klasifikovat podle jejich nutričního stavu.

Na konci návštěvy dostanou pacienti svou náhodně přidělenou zubní pastu a budou instruováni, aby si čistili zuby třikrát denně a zdrželi se používání jakýchkoli jiných prostředků ústní hygieny. Druhá a poslední návštěva bude naplánována po 1 měsíci.

II. Druhá návštěva (T1):

Postup z první návštěvy se bude opakovat, přičemž budou shromažďována stejná data. Kromě toho bude pacient hodnotit snadnost použití, chuť, spokojenost, přijetí, preference a doporučení od 0 do 10. V této době bude u řádných pacientů prováděna orální profylaxe a/nebo olupování kořenů.

Analýza cytokinů Vzorky z nestimulovaných slin budou okamžitě odeslány do mikrobiologické laboratoře nemocnice UB Bellvitge. Vzorky budou odstředěny (14 000 ot./min, 10 min, 4 °C) a supernatanty budou skladovány při -80 °C až do stanovení koncentrací TNF-α, IL-1β a IL-4 pomocí enzymatického imunosorbentního testu (ELISA). Budou použity komerční soupravy (BioLegend ELISA MaxDeluxe Kit Human TNF, IL-1β e IL-4 a Human TNF, IL-1β e IL-4 Enhanced Sensitivity Flex test BD Cytometric Bead Array).

Mikrobiologická analýza Impregnované papírové hroty budou umístěny do 2ml kryozkumavky a okamžitě odeslány do mikrobiologické laboratoře UB Bellvitge Hospital, kde budou zmrazeny na -80ºC pro další zpracování pomocí kvantitativní polymerázové řetězové reakce (qPCR v reálném čase) pomocí testu TaqMan. Celková bakteriální zátěž, vyjádřená jako logaritmické jednotky (log) jednotek tvořících kolonie na ml (cfu/ml), bude stanovena amplifikací genu 16S rRNA pomocí univerzálních prokariotických primerů.

Statistická analýza Velikost vzorku byla vypočítána pomocí α=0,05, ß=0,2 a 2-stranné hladiny významnosti 95 %. Na základě údajů z pilotní studie testující stejné složení, která prokázala významné snížení zátěže patogeny v subgingiválním sulku a bakteriálním plaku po 4 týdnech používání testovaného přípravku u zdravých pacientů, bude náborováno dvanáct pacientů na skupinu.