Wpływ na poziom cytokin IL-1β, IL-4, TNF-α i mikroflorę jamy ustnej kompozycji zawierającej oliwę z oliwek, betainę i ksylitol dostarczanej jako codzienna pasta do zębów.

Integralność bariery odgrywa kluczową rolę w homeostazie wrodzonego układu odpornościowego. Bariery te, ich komórki i sieci, jeśli są nienaruszone i zamieszkane przez eubiotyczny mikrobiom, regulują odporność i stany zapalne, utrzymując organizm w stanie homeostazy i równowagi z wynikami zdrowotnymi.

Zewnętrzny nacisk na błony śluzowe i bariery skórne ze strony obcych substancji i warunków środowiskowych stwarza zmieniające się podłoże dla ekspresji cytokin prozapalnych, prowadząc do tego, co jest dziś znane jako infekcja metaboliczna i zapalenie ogólnoustrojowe. Utrzymujące się ciśnienie może przekroczyć mechanizmy kontrolne układu odpornościowego, powodując niekontrolowane uwalnianie różnych cytokin prozapalnych, takich jak IL-1β i TNF-α, które dodatkowo przyczyniają się do przerwania bariery oraz stanu rozregulowania układu odpornościowego i stanu zapalnego. Wręcz przeciwnie, IL-4 przypisuje się zarówno właściwości przeciwzapalne, jak i prozapalne.

Zapalenie przyzębia, druga po otyłości najczęstsza przyczyna ogólnoustrojowego obciążenia zapalnego, jest ważnym czynnikiem regulującym w górę poziom cytokin prozapalnych w ślinie i oferuje praktyczny model pozwalający zająć się złożonym powiązaniem między stanem zapalnym a przewlekłymi chorobami zapalnymi.

PROJEKT BADANIA Obecne badanie będzie randomizowanym, kontrolowanym badaniem z udziałem pacjentów z niełagodną chorobą przyzębia, zaplanowanych na rutynową wizytę na Uniwersytecie w Barcelonie (UB), Szpitalu Stomatologicznym Uniwersytetu w Barcelonie (HOUB), kampusie Bellvitge.

Randomizacja i maskowanie Pacjenci zostaną losowo przydzieleni za pomocą losowej sekwencji przydziału wygenerowanej przy użyciu programu Microsoft Office Excel 2019 (Microsoft Corporation, Waszyngton, USA, 2013). Do przydzielenia uczestników do Grupy Interwencyjnej (IG) lub Grupy Kontrolnej (CG) zostanie zastosowany podział 1:1.

Grupa interwencyjna użyje eksperymentalnej pasty do zębów zawierającej nowatorski skład składający się z oliwy z oliwek, betainy i ksylitolu. Grupa kontrolna będzie stosować pastę do zębów placebo. Substancje pomocnicze będą wspólne dla obu grup. Wszystkie produkty będą pakowane w białe tuby z etykietą identyfikującą liczbę pacjentów. Informacje o produkcie przydzielone każdemu pacjentowi zostaną umieszczone w zapieczętowanej kopercie, zawierającej wyłącznie numer przydziału pacjenta, aby zachować integralność procesu zaślepiania. Zarówno uczestnicy, jak i operatorzy zostaną zamaskowani zgodnie z przypisaniem.

Interwencje Uczestnicy obu grup będą uczęszczani do kliniki stomatologicznej na początku i na końcu badania. Podczas pierwszej wizyty zostaną odzyskane dane wyjściowe. Ostatnia wizyta odbędzie się po miesiącu w celu ostatecznego zebrania danych.

I. Pierwsza wizyta (T0):

Pacjenci zostaną poinformowani o szczegółach badania. Dane dotyczące płci i wieku zostaną odzyskane z historii choroby. Nie będzie prowadzone żadne leczenie periodontologiczne, higiena ani profilaktyka, aby uniknąć zmiany mikroflory poddziąsłowej. Odzyskane zostaną następujące dane:

• Badanie błony śluzowej jamy ustnej
• Wskaźnik zębów zepsutych, brakujących i wypełnionych (DMFT).
• Indeks płytki O'Leary'ego
• Podstawowe badanie periodontologiczne: Sondowanie głębokości i kliniczna utrata przyczepu
• Sialometria: Mierzono niestymulowany i stymulowany wypływ śliny.
• pH śliny Do analizy cytokin zostanie użyta ślina niestymulowana. Próbki zostaną pobrane sterylnymi papierowymi ćwiekami wprowadzonymi do bruzdy dziąsłowej co najmniej trzech zębów, najlepiej 16, 22, 41, 47, w celu analizy mikrobiologicznej.

Masa i wzrost uczestnika zostaną zarejestrowane, a wskaźnik masy ciała (BMI) zostanie obliczony, aby umożliwić klasyfikację uczestników według ich stanu odżywienia.

Na koniec wizyty pacjenci otrzymają losowo przydzieloną pastę do zębów i zostaną poinstruowani, aby myć zęby trzy razy dziennie i powstrzymać się od stosowania innych produktów do higieny jamy ustnej. Druga i ostatnia wizyta zostanie wyznaczona po upływie 1 miesiąca.

II. Druga wizyta (T1):

Procedura z pierwszej wizyty zostanie powtórzona, zbierając te same dane. Dodatkowo pacjent oceni łatwość użycia, smak, satysfakcję, akceptację, preferencje i rekomendacje w skali od 0 do 10. W tym czasie u odpowiednich pacjentów będzie wykonywana profilaktyka jamy ustnej i/lub skaling korzeni.

Analiza cytokin Próbki niestymulowanej śliny zostaną niezwłocznie przesłane do laboratorium mikrobiologicznego szpitala UB Bellvitge. Próbki zostaną odwirowane (14000 obr./min, 10 min, 4°C), a supernatanty będą przechowywane w temperaturze -80°C do czasu oznaczenia stężeń TNF-α, IL-1β i IL-4 za pomocą enzymatycznego testu immunoenzymatycznego (ELISA). Zostaną użyte komercyjne zestawy (BioLegend ELISA MaxDeluxe Kit Human TNF, IL-1β i IL-4 oraz Human TNF, IL-1β i IL-4 Enhanced Sensitivity Flex test BD Cytometric Bead Array).

Analiza mikrobiologiczna Impregnowane ćwieki papierowe zostaną umieszczone w krioprobówce o pojemności 2 ml i natychmiast przesłane do laboratorium mikrobiologicznego szpitala UB Bellvitge, gdzie zostaną zamrożone w temperaturze -80°C w celu dalszej obróbki za pomocą ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy (qPCR w czasie rzeczywistym) przy użyciu testu TaqMan. Całkowite obciążenie bakteriami, wyrażone jako jednostki logarytmiczne (log) jednostek tworzących kolonie na ml (cfu/ml), zostanie określone poprzez amplifikację genu 16S rRNA przy użyciu uniwersalnych starterów prokariotycznych.

Analiza statystyczna Liczbę próby obliczono przy użyciu α=0,05, ß=0,2 i dwustronnego poziomu istotności wynoszącego 95%. Na podstawie danych z badania pilotażowego testującego ten sam skład, które wykazało istotne zmniejszenie obciążenia patogenami w bruździe poddziąsłowej i płytce bakteryjnej po 4 tygodniach stosowania badanej kompozycji u zdrowych pacjentów, do każdej grupy zostanie wybranych dwunastu pacjentów.