Efeitos nos níveis de citocinas IL-1ß, IL-4, TNF-α e na microbiota oral de uma composição que compreende azeite, betaína e xilitol, administrada como pasta de dente diária.

A integridade da barreira desempenha um papel fundamental na homeostase do sistema imunológico inato. Essas barreiras, suas células e redes, quando intactas e habitadas por um microbioma eubiótico, regulam a imunidade e a inflamação, mantendo o corpo em estado de homeostase e equilíbrio com o resultado da saúde.

A pressão externa sobre as barreiras mucosas e cutâneas causada por substâncias estranhas e circunstâncias ambientais proporciona um terreno de mudança para a expressão de citocinas pró-inflamatórias, levando ao que hoje é conhecido como infecção metabólica e inflamação sistêmica. A pressão mantida pode exceder os mecanismos de controlo do sistema imunitário, resultando numa libertação descontrolada de uma variedade de citocinas pró-inflamatórias, tais como IL-1ß e TNF-α, que contribuirão ainda mais para a quebra da barreira e para um estado de desregulação imunológica e inflamação. Pelo contrário, foram atribuídas à IL-4 propriedades anti-inflamatórias e pró-inflamatórias.

A inflamação periodontal, o segundo contribuinte mais frequente para a carga inflamatória sistêmica atrás da obesidade, é um fator importante que regula positivamente as citocinas pró-inflamatórias salivares e oferece um modelo prático para abordar o complexo crosstalk entre inflamação e doenças inflamatórias crônicas.

DESENHO DO ESTUDO O estudo atual será um ensaio clínico randomizado em pacientes periodontais não leves agendados para uma consulta de rotina na Universidade de Barcelona (UB), Hospital Odontológico Universidade de Barcelona (HOUB), Campus Bellvitge.

Randomização e mascaramento Os pacientes serão designados aleatoriamente por meio de uma sequência de atribuição aleatória gerada usando o Microsoft Office Excel 2019 (Microsoft Corporation, Washington, EUA, 2013). Uma distribuição 1:1 será usada para atribuir os participantes ao Grupo de Intervenção (GI) ou ao Grupo de Controle (GC).

O grupo intervenção utilizará um creme dental experimental contendo uma nova composição composta por azeite, betaína e xilitol. O grupo controle usará um creme dental placebo. Os excipientes serão comuns a ambos os grupos. Todos os produtos serão acondicionados em bisnagas brancas com etiqueta que identificará o número do paciente. As informações do produto alocadas a cada paciente serão colocadas em envelope lacrado, exibindo exclusivamente o número de alocação do paciente para manter a integridade do processo de cegamento. Tanto os participantes quanto os operadores estarão mascarados para a atribuição.

Intervenções Os participantes de ambos os grupos serão atendidos na clínica odontológica no início e no final do estudo. Durante a primeira visita, os dados iniciais serão recuperados. A visita final ocorrerá após um mês para coleta de dados final.

I. Primeira Visita (T0):

Os pacientes serão informados sobre os detalhes do estudo. Os dados de sexo e idade serão recuperados do histórico médico. Nenhum tratamento periodontal, higiene ou profilaxia será realizado para evitar alteração da microbiota subgengival. Os seguintes dados serão recuperados:

• Exame da mucosa oral
• Índice de dentes cariados, perdidos e obturados (CPOD)
• Índice de Placa O'Leary
• Exame Periodontal Básico: Profundidade de sondagem e perda clínica de inserção
• Sialometria: Foram medidos o fluxo salivar não estimulado e estimulado.
• pH salivar Saliva não estimulada será usada para análise de citocinas. As amostras serão coletadas com pontas de papel estéreis inseridas no sulco gengival de pelo menos três dentes, preferencialmente de 16, 22, 41, 47 para análise microbiana.

O peso e a altura do participante serão registrados e o índice de massa corporal (IMC) calculado para permitir a classificação dos participantes de acordo com seu estado nutricional.

Ao final da visita, os pacientes receberão o creme dental designado aleatoriamente e serão instruídos a escovar os dentes três vezes ao dia e abster-se de usar qualquer outro produto de higiene bucal. A segunda e última visita será agendada após 1 mês.

II. Segunda Visita (T1):

O procedimento da primeira visita será repetido, coletando os mesmos dados. Além disso, o paciente avaliará a facilidade de uso, sabor, satisfação, aceitação, preferência e recomendação de 0 a 10. Neste momento, a profilaxia oral e/ou raspagem radicular será realizada nos devidos pacientes.

Análise de citocinas Amostras de saliva não estimulada serão enviadas imediatamente ao laboratório de microbiologia do Hospital UB Bellvitge. As amostras serão centrifugadas (14.000 rpm, 10 min, 4ºC) e os sobrenadantes armazenados a -80ºC até determinação das concentrações de TNF-α, IL-1β e IL-4 por ensaio imunoenzimático (ELISA). Serão utilizados kits comerciais (BioLegend ELISA MaxDeluxe Kit Human TNF, IL-1β e IL-4 e Human TNF, IL-1β e IL-4 Enhanced Sensitivity Flex test BD Cytometric Bead Array).

Análise microbiológica Pontas de papel impregnadas serão colocadas em criotubo de 2 ml e enviadas imediatamente ao laboratório de microbiologia do Hospital UB Bellvitge, onde serão congeladas a -80ºC para posterior processamento por reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR em tempo real) utilizando ensaio TaqMan. A carga total de bactérias, expressa em unidades logarítmicas (log) de unidades formadoras de colônias por mL (ufc/ml), será determinada pela amplificação do gene 16S rRNA usando primers procarióticos universais.

Análise estatística O tamanho da amostra foi calculado usando α=0,05, ß=0,2 e um nível de significância bicaudal de 95%. Com base em dados de um estudo piloto testando a mesma composição, que mostrou uma redução significativa na carga de patógenos no sulco subgengival e na placa bacteriana após 4 semanas de uso da composição testada em pacientes saudáveis, serão recrutados doze pacientes por grupo.