Ændringer i adaptive immunresponser og effektorcelleresponser ved næseallergeneksponering - en pilotundersøgelse

Undersøgelsens rationelle

Tidligere undersøgelser af dynamikken i in vivo kliniske og immunologiske reaktioner på nasal allergen har fokuseret på bestemte parametre, men har ikke behandlet kinetikken i samspillet mellem de forskellige faktorer (dvs. allergenspecifikke IgE-niveauer, lokal IgE- og mediatorproduktion, basofile følsomhed, kutan følsomhed). Efterforskerne foreslår derfor et randomiseret dobbeltblindt placebokontrolleret studie, hvor Undersøgerne udfordrer patienter intranasalt med allergenekstrakt og derefter nøje overvåger både kliniske og immunologiske immunresponser over en periode på 4 måneder. Herefter vil der være yderligere 4 besøg før og efter birkesæsonen.

Forskerne vil se på umiddelbar og sen fase af immunresponser på birkepollenekstrakt næseudfordring uden for pollensæsonen. Undersøgelsesdeltagere vil indledningsvis gennemgå 3 på hinanden følgende dage med næseallergenudfordring og derefter blive fulgt tæt op i en periode på 1 år. For at vurdere klinisk respons på allergeneksponering vil efterforskerne gøre brug af hudpriktest (SPT), total nasal symptom score (TNSS), nasal endoskopi og Peak Inspiratory Nasal Flow Meter (PNIF). For at vurdere immunologiske reaktioner vil der blive taget prøver, herunder blod, næseslimhindeprøver og næsesekret.

Studere design

I dette enkeltcenter, randomiserede, placebokontrollerede, dobbeltblindede studie vil i alt 36 (6 for et præstudie) patienter blive rekrutteret til denne undersøgelse på frivillig basis og vil blive randomiseret til at modtage en nasal udfordring med begge birk. pollenekstrakt eller placebo. Randomisering vil blive stratificeret i henhold til Bet v 1-specifikke IgE-niveauer for at tillade lige fordeling i begge grupper. 30 Undersøgelsesdeltagere vil modtage nasal provokation uden for birkepollensæsonen med enten birkepollenekstrakt eller placebo tre på hinanden følgende dage og vil derefter blive fulgt op på regelmæssig basis i op til fire måneder.

Indledningsvis, forud for undersøgelsen med 30 patienter, vil 6 birkepollenallergiske forsøgspersoner gennemgå en kort protokol for at sikre, at

1. Allergenkoncentrationen, der anvendes til nasal provokation, er tilstrækkelig til at fremkalde en stigning af IgE-antistoffer
2. At titreringerne af hudpriktesten er tilstrækkelige

3. At tidspunktet for at tage næsesekret til bestemmelse af mediatorer er tilstrækkeligt.

   Skulle resultaterne fra disse 6 patienter afsløre, at enten nasal allergenkoncentration, hudtesttitreringer eller timing af nasale sekretioner ikke er tilstrækkelige, vil en ændring blive forelagt den etiske komité.

   Den forkortede protokol vil omfatte 5 besøg:

   • komplet screeningsbesøg
   • komplet besøg N1
   • besøg N2 uden blodprøvetagning og uden næseprøve
   • besøg N3 uden blodprøvetagning og uden næseprøve
   • komplet besøg N7

   Screeningsbesøg

   Procedure

   • Underskrivelse af formularen til informeret samtykke (version 2.1. for indledende undersøgelse med kort protokol, version 1.8 (opdateret til forlængelse) for hovedundersøgelse)
   • Tildeling af screeningsnummer
   • Demografiske data
   • Historie om allergi
   • Vurdering af in- og eksklusionskriterier
   • Graviditetstest for kvinder, hvis der er behov for SPT
   • Medicinsk historie
   • Samtidig medicinering
   • Anterior rhinoskopi
   • Standard SPT med kommercielt ekstrakt fra: hassel, aske, græsblanding, bynke, bynke, D. pteronyssinus, D. farina, katte- og hundeskæl, alternaria, cladosporium, histamin og negativ kontrol
   • Titreret hudpriktest med kommercielt birkepollenekstrakt
   • Blodprøvetagning (max 60 ml hepariniseret blod og serum) - En del af blodprøven sendes direkte til laboratoriet for analyse af basofil aktivering, total IgE og specifikt IgE til relevante allergener. Fra resten af ​​blodet vil RNA blive fremstillet og opbevaret ved -80°C og serum vil blive adskilt og opbevaret ved -20°C
   • næseprøveudtagning (næseskylning, mucosal curette prøvetagning og nasal sekret prøvetagning)

   Besøg N0

   Krav til timing: Besøg N0 er planlagt mellem 2 uger og 4 dage før besøg N1. Dette er kun for patienter, der blev screenet mere end 3 uger før besøg N1

   Procedure:

   • Blodprøvetagning
   • Næseprøveudtagning (skylning, mucosal curette prøvetagning og nasal sekret prøvetagning)
   • Titreret SPT
   • PNIF
   • Graviditetstest for kvinder, hvis den sidste test var mere end en måned siden

   Besøg N1

   Procedure:

   • Revurdering af ind- og udelukkelseskriterier (allergenspecifikke IgE-resultater)
   • Randomisering: Forsøgspersoner vil blive tildelt et behandlingsnummer
   • Baseline Blodprøvetagning
   • Indsamling af baseline næseprøver (skylning, næseslimhindeprøvetagning og næsesekretprøve)
   • Baseline TNSS-score
   • Optagelse af uønskede hændelser (AE).
   • Samtidig medicinering
   • PNIF givet til patienter og forklaring/demonstration af hvordan det virker. Patienterne vil få en papirdagbog til at holde styr på daglige PNIF-værdier (fra N1 til N5). Dette mejeri vil også blive brugt til at registrere daglige TNSS-scores (N4-N5).
   • Graviditetstest
   • i. administration af birkepollenekstrakt eller placebo
   • Dokumentation af symptomer umiddelbart efter provokation
   • Blod, PNIF, nasal prøvetagning (næseskylning, mucosal curette prøvetagning og nasal sekretion prøvetagning) og TNSS score, 20 min, 40 min, 1 time, 2 timer, 4 timer, 20-24 timer efter administration af birkepollenekstrakt (20-24 timers tidspunkt vil blive udført ved besøg N2).
   • Næseprøvetagning, PNIF og TNSS score efter 10 min, 3 timer, 5 timer, 6 timer, 7 timer, 8 timer efter administration af birkepollenekstrakt
   • Titreret SPT
   • administration af redningsmedicin om nødvendigt (azelastin næsespray, desloratadin 5mg)

   Besøg N2

   Krav til timing:

   Besøg N2 er planlagt dagen efter besøg N1

   Procedure:

   • Blod, PNIF, nasal prøveudtagning (skylning, mucosal curette prøvetagning og nasal sekret prøvetagning) og TNSS score (20-24 timers tidspunkt efter administration af birkepollenekstrakt i N1).
   • AE optagelse
   • Samtidig medicinering
   • i. administration af birkepollenekstrakt eller placebo efterfulgt af en observationsperiode på 2 timer
   • Dokumentation af symptomer umiddelbart efter provokation
   • administration af redningsmedicin om nødvendigt (azelastin næsespray, desloratadin 5mg)
   • Bemærk: I de indledende 6 forsøgspersoner vil der ikke blive taget næse- og blodprøver

   Besøg N3

   Krav til timing:

   Besøg N3 er planlagt dagen efter besøg N2

   Procedure:

   • Blodprøvetagning før provokation
   • Indsamling af næseprøver før provokation (skylning, mucosal curette prøvetagning og nasal sekret prøvetagning)
   • TNSS-score før provokation
   • Titreret SPT
   • Optagelse af uønskede hændelser (AE).
   • Samtidig medicinering
   • i. administration af birkepollenekstrakt eller placebo
   • Dokumentation af symptomer umiddelbart efter provokation
   • Blod, PNIF, næseprøveudtagning (skylning, mucosal curette prøvetagning og nasal sekretion prøvetagning) og TNSS score 20 min, 40 min, 1 time, 2 timer, 4 timer, 20-24 timer og efter administration af birkepollenekstrakt (20-24 timers tidspunkt vil blive udført kl. besøg N4).
   • Næseprøvetagning, PNIF og TNSS score efter 10 min, 3 timer, 5 timer, 6 timer, 7 timer, 8 timer efter administration af birkepollenekstrakt
   • Administration af redningsmedicin om nødvendigt (azelastin næsespray, desloratadin 5mg)
   • Bemærk: I de indledende 6 forsøgspersoner vil der ikke blive taget næse- og blodprøver

   Besøg N4

   Krav til timing:

   Besøg N4 er planlagt dagen efter besøg N3

   Procedure:

   • Blod, PNIF, nasal prøvetagning (skylning, mucosal curette prøvetagning og nasal sekretion prøvetagning) og TNSS score 20-24 timer efter administration af birkepollenekstrakt.

   Besøg N5

   Besøg N5 er planlagt 14 ±4 dage efter besøg N4:

   Procedure:

   • Blod- og næseprøver (udskylning, mucosal curette og nasal sekretprøve)
   • PNIF
   • Titreret SPT
   • TNSS-score
   • AE optagelse
   • Graviditetstest for kvinder, hvis den sidste test var mere end en måned siden
   • Indsamling af papirdagbog fra Visit N1 til N5

   Besøg N6

   Krav til timing:

   Besøg N6 er planlagt 14 ±4 dage efter besøg N5

   Procedure:

   • Blod- og næseprøver (udskylning, mucosal curette og nasal sekretprøve)
   • PNIF
   • Titreret SPT
   • AE optagelse
   • Graviditetstest for kvinder, hvis den sidste test var mere end en måned siden

   Besøg N7

   Krav til timing:

   Besøg N7 er planlagt 14 ±4 dage efter besøg N6

   Procedure:

   • Blod- og næseprøver (udskylning, mucosal curette og nasal sekretprøve)
   • PNIF
   • Titreret SPT
   • AE optagelse
   • Graviditetstest for kvinder, hvis den sidste test var mere end en måned siden

   Besøg N8

   Krav til timing:

   Besøg N8 er planlagt 14 ±4 dage efter besøg N7

   Procedure:

   • Blod- og næseprøver (udskylning, mucosal curette og nasal sekretprøve)
   • PNIF
   • Titreret SPT
   • score
   • AE optagelse
   • Graviditetstest for kvinder, hvis den sidste test var mere end en måned siden

   Besøg N9

   Krav til timing:

   Besøg N9 er planlagt 14 ±4 dage efter besøg N8

   Procedure:

   • Blod- og næseprøver (udskylning, mucosal curette og nasal sekretprøve)
   • PNIF
   • Titreret SPT
   • AE optagelse
   • Graviditetstest for kvinder, hvis den sidste test var mere end en måned siden

   Besøg N10

   Krav til timing:

   Besøg N9 er planlagt 14 ±4 dage efter besøg N9

   Procedure:

   • Blod- og næseprøver (udskylning, mucosal curette og nasal sekretprøve)
   • PNIF
   • Titreret SPT
   • AE optagelse
   • Graviditetstest for kvinder, hvis den sidste test var mere end en måned siden

   Besøg N11 - Afsluttende besøg af nasal provokationskomponent

   Krav til timing:

   Besøg N11 er planlagt 28 ±4 dage efter besøg N10

   Procedure:

   • Blod til immunologiske parametre og næseprøver (udskylning, slimhindecurette og næsesekretprøve)
   • PNIF
   • Titreret SPT
   • AE optagelse
   • Graviditetstest for kvinder, hvis den sidste test var mere end en måned siden

   Besøg S1 (Udvidelse - Godkendt af MUW Ethics Committee den 11. februar 2019)

   Krav til timing: Besøg S1 er planlagt 4 uger før den forventede start på birkesæsonen (+/- 7 dage)

   Procedure:

   • Papirpollen og PNIF-dagbog forklaret til patienterne og bedt om at udfylde dagligt i birkesæsonen
   • Blod- og næseprøver (udskylning, mucosal curette og nasal sekretprøve)
   • Titreret SPT
   • AE optagelse
   • Graviditetstest for kvinder, hvis den sidste test var mere end en måned siden

   Besøg S2

   Krav til timing: Besøg S2 er planlagt 4 uger efter afslutningen af ​​birkesæsonen (+/- 7 dage)

   Procedure:

   • Blod- og næseprøver (udskylning, mucosal curette og nasal sekretprøve)
   • Indsamling papir dagbog
   • Observeret PNIF
   • Titreret SPT
   • TNSS-score ved besøg
   • AE optagelse
   • Graviditetstest for kvinder, hvis den sidste test var mere end en måned siden

   Besøg S3

   Krav til timing:

   Besøg S3 er planlagt 4 uger efter besøg S2 - (+/- 7 dage)

   Procedure:

   • Blod- og næseprøver (udskylning, mucosal curette og nasal sekretprøve)
   • Observeret PNIF
   • Titreret SPT
   • TNSS-score ved besøg
   • AE optagelse
   • Graviditetstest for kvinder, hvis den sidste test var mere end en måned siden

   Besøg S4 og End of Study

   Krav til timing:

   Besøg S4 er planlagt 1 år efter starten af ​​hele undersøgelsen (1 år efter besøg N0) +/- 7 dage

   Procedure:

   • Blod- og næseprøver (udskylning, mucosal curette og nasal sekretprøve)
   • Observeret PNIF
   • Titreret SPT
   • TNSS-score ved besøg
   • AE optagelse
   • Graviditetstest for kvinder, hvis den sidste test var mere end en måned siden
   • Slut på studiet

   Beskrivelser af undersøgelsesprocedurer

   Sygehistorie for patienter, demografiske data, samtidig medicin Patienter vil blive bedt om deres sygehistorie, herunder demografiske data og samtidig medicinering, deres allergiske symptomer inklusive intensitet og varighed og deres allergiske medicinhistorie.

   Historie om allergi og TNSS-score

   Patienterne vil blive bedt om forekomst af nysen, rhinoré, nasal kløe, tilstoppet næse og søvnkvalitet og om at vurdere hvert symptom ved hvert besøg og føre en journal derhjemme. De vil bruge følgende symptomscoremetode: 0 = fraværende; 1 = mild - til stede, men let tolereret; 2 = moderat - til stede, symptom er generende, men forstyrrer ikke dagligdags aktiviteter; 3 = svær - symptom er svært at tolerere og forstyrrer dagligdagens aktiviteter (24). Ud over dette vil der være en visuel analog skala for den samlede sygdomsbyrde på formularen.

   Anterior rhinoskopi

   Anterior rhinoskopi vil blive udført én gang under screeningsbesøget for at udelukke anatomiske afvigelser (f. septal deviation) eller patologiske ændringer (f.eks. næsepolypper). Det vil blive udført ved at bruge et spekulum med patienten siddende med hovedet lidt tilbage.

   Peak Inspiratory Nasal Flow Meter (PNIF)

   Bærbarheden og letheden af ​​PNIF giver en unik mulighed for at opnå objektive målinger, mens patienterne er hjemme. Det er også for nylig blevet valideret som et undersøgelsesværktøj under nasal allergenudfordring.

   Procedure:

   Ved besøget vil 1 patienter blive trænet i at bruge PNIF-enheden (In-check, Inspiratorisk flowmåler) og vil modtage en med hjem indtil N5. PNIF'en bruger et rør med variabel diameter kalibreret direkte i liter pr. minut sammen med en indikatorring med lav inerti. Ringens position efter en inspiratorisk manøvre angiver det maksimale flow, der er opnået. Enheden fungerer, når en patient inhalerer gennem munden eller næsen, dette får luft til at blive trukket gennem måleren, og en markør bevæger sig langs skalaen for at angive inhalationshastigheden. Den opnåede flowhastighed kan noteres ved at kontrollere cursorens position i forhold til den kalibrerede skala.

   PNIF i studiegennemførelse:

   PNIF'en vil blive givet til studiedeltagere med hjem, så de kan holde et dagligt eller ugentligt mejeri (afhængigt af undersøgelsens fase) af deres nasale luftstrøm. De vil også blive bedt om at tage dem med til alle studiebesøg, så observerede PNIF-målinger kan tages.

   Hudprikketest

   4.5.1 Fremgangsmåde: Allergener indsættes i underarmens dermis ved forsigtigt at prikke huden gennem en dråbe (20 ul) af en allergenholdig opløsning med en steril lancet med mindst 2 cm mellem hvert enkelt påføringspunkt. 0,9 % natriumchloridopløsning vil blive brugt som negativ og histamin som positiv kontrol. Hos tidligere sensibiliserede individer vil kløende hævelse og en rødme af huden (hvid- og flarereaktion) forekomme inden for 15 minutter efter udsættelse for det respektive allergen. Efter 20 minutter vil allergenopløsninger blive tørret af, og randene af svalerne vil blive sporet med en kuglepen. Gennemsigtig tape vil blive klæbet på huden for at overføre omridset af wheal til tapen til optegnelserne. Overfladen af ​​hvalerne vil blive beregnet ved digital planimetri. For inklusion vil hvaler på mindst 3 mm i diameter blive betragtet som positive reaktioner.

   Testløsninger:

   Kommercielt tilgængeligt birkepollenekstrakt og et panel af træ- og græspollen, ukrudts- og flerårige allergener (Allergopharma, Wien, Østrig) vil blive brugt ved screeningsbesøget og vil blive opbevaret i henhold til producentens anvisninger. Som kontroller vil steril 0,9% NaCl-opløsning (negativ kontrol) og histamin (positiv kontrol, Allergopharma, Wien, Østrig) blive brugt. De vil blive opbevaret i henhold til producentens anvisninger.

   SPT i studiegennemførelse:

   Screeningsbesøg:

   En standard hudpriktest med kommercielt birkepollenekstrakt og et panel af træ- og græspollen, ukrudts- og flerårige allergener (alle Allergopharma, Wien, Østrig) som brugt til rutinediagnostik i allergiklinikken i ØNH-afdelingen vil blive udført for at vurdere patientens sensibiliseringsprofil ved screeningsbesøget.

   Screening og besøg N0, N5 - N11, S1-S4 En titreret hudpriktest til birkeekstrakt vil blive udført med stigende fortyndinger (fortyndinger øges med en faktor 3 op til 1:60 000 (=11 fortyndingstrin) for at bestemme den laveste koncentration, der fremkalder en hudreaktion. Hudtest til alle fortyndinger vil blive udført i firdobbelte. Kommerciel positiv kontrolopløsning (histamin) og negativ kontrol vil blive udført i to eksemplarer.

   Sikkerhedsforanstaltninger Som en sikkerhedsforanstaltning vil patienter blive overvåget i 30 minutter efter test. Alle undersøgelser vil blive foretaget i ØNH-afdelingens ambulatorium, hvor fuldt akutudstyr er tilgængeligt.

   Blodprøvetagning og måling af immunologiske parametre

   Blodprøver vil blive taget ved screeningsbesøget og ved alle studiebesøg ved punktering af antecubitalvenen før hudtest. Et maksimum på 60 ml pr. besøg vil blive taget enten hepariniseret (f.eks. til basofile følsomhedsassays) eller til fremstilling af serum (f.eks. til vurdering af total- og allergenspecifikke immunoglobulinniveauer eller RBL-assay). Serumhætteglas vil blive behandlet, og serum vil blive opbevaret ved -20°C. Allergenspecifik IgE af blodprøver fra screeningsbesøget vil blive målt af CAP-FEIA for at vurdere den allergenspecifikke RAST-klasse for patienterne. Måling af total, fri og allergenspecifik serum IgE, IgG, IgA og IgM udføres enten ved CAP-FEIA, ved mikroarraymåling eller ELISA. Målingen vil blive udført i slutningen af ​​undersøgelsen i alle indsamlede serumprøver for at minimere interassayvariation. Måling af basofile responser på allergen, fMLP og anti-IgE vil blive udført ved hvert besøg. Kort fortalt vil basofiler blive udsat for forskellige koncentrationer af anti-IgE, fMLP eller rekombinante allergener i 15 minutter og derefter undersøgt for ekspression af CD 63 og CD203c ved hjælp af flowcytometri. Alternativt vil histaminfrigivelse blive bestemt af kommercielt tilgængelige histaminfrigivelseskit.

   Graviditetstest

   Hos kvindelige patienter vil graviditet blive udelukket med en standard uringraviditetstest. Testen vil blive udført før den første hudpriktest ved screeningsbesøget og efterfølgende en gang om måneden.

   Næseprøvesamling

   Næseprøvetagning vil blive udført ved alle besøg. For hvert besøg vil der blive indsamlet prøver ved hjælp af nasosorption FXi/PU (indeholder en syntetisk absorberende matrix (SAM)) eller en 10 cm lang plastikcurette (begge enheder fra Hunt Developments, UK)

   Nasosorption ved hjælp af FXi/PU (Hunt Developments, UK):

   Under visualisering vil enheden blive indsat i næsehulen og blive placeret langs sidevæggen mod den nedre turbinat. Patientens pegefinger vil blive brugt til at trykke på de ydre aspekter af alarmen og laterale næsebrusk for at holde enheden på plads. Efter 1 minut vil enhederne blive fjernet, og væsken vil blive ekstraheret ved centrifugering. Supernatanten vil blive frosset ved -70°C indtil yderligere analyse for tilstedeværelsen af ​​allergenspecifikke og totale Ig-niveauer, mediator- og cytokinniveauer.

   Slimhinde-mRNA-prøvetagning En 10 cm nasal curette vil blive brugt. Under direkte visualisering vil curetten blive bragt til at ligge mod den midterste del af den inferiøre turbinat. Curetten vil blive presset mod slimhinden bevæget udad 2-3 gange. Denne bevægelse gentages 2-3 gange for at sikre god prøveopsamling. Denne curette og teknik har vist sig ikke at forårsage væsentligt ubehag for patienter, og den har derfor den fordel, at der ikke er behov for lokalbedøvelse. Efter opsamling vil celler blive lyseret i Qiagen RLT-buffer og opbevaret ved -70C til senere mRNA-analyse.

   4.9 Intranasal udfordring

   Birkepollenekstrakt (Allergopharma, Wien, Østrig) vil blive friskfortyndet i steril 0,9% natriumchloridopløsning og vil blive administreret ved hjælp af en afmålt pumpe. Allergenet vil blive administreret ved hjælp af en afmålt pumpe, der leverer 15 μl pr. pust til begge næsebor ved besøg N1, N2, N3. Hvis patienten lider af næse- eller øjensymptomer efter udfordringen, vil der blive leveret azelastin næsespray eller desloratadin 5 mg.

   Randomiseringsprocedure

   Ved besøg N1 i hovedundersøgelsen vil patienter blive randomiseret til en af ​​de to grupper (birkepollenekstrakt eller placebo). Undersøgelsesemner vil blive randomiseret (forhold 2:1 for provokation versus kontrol) ved hjælp af det online randomiseringsprogram "randomizer" (www.meduniwien.ac.at/randomizer), som vedligeholdes på Institut for Medicinsk Informatik, Statistik og Dokumentation på Medical Universitetet i Graz, Graz, Østrig. Forholdet 2:1 er valgt, fordi variansen af ​​Ig-målinger og afledte mængder forventes at være større i provokationsgruppen på grund af forventede større overordnede Ig-niveauer, se også prøvestørrelsesovervejelserne senere i dette dokument.

   Randomiseringen vil blive udført af en person, der ikke er involveret i undersøgelsen og ikke har kontakt med patienterne for at sikre, at undersøgelsen bliver dobbeltblindet.

   Undersøgelsesprodukter og undersøgelsesmedicin

   Birkepollenekstrakt:

   Birkepollenekstrakt (Allergopharma, Wien, Østrig) vil blive brugt til intranasal udfordring. Birkepollenekstrakt ankommer frysetørret og opløses i sterilt 0,9 % natriumchlorid. Indholdet af Bet v 1 i ekstraktet vil blive bestemt ved immunblotting ved brug af antistofprober, der er specifikke for Bet v 1. Til sidst vil ekstraktet blive fortyndet, så slutkoncentrationen af ​​Bet v 1 bliver 50 μg/ml, som denne koncentration tidligere har været. vist sig at fremkalde ændringer i specifikke IgE-niveauer ved nasal udfordring.

   Kontrolløsninger:

   Kontrolopløsninger vil omfatte natriumchlorid 0,9 % som negativ kontrol til hudpriktest og som placebo til intranasal udfordring. Histamin (Allergopharma, Wien, Østrig) vil blive brugt som en positiv kontrol til hudpriktesten. De vil blive opbevaret i henhold til producentens anvisninger.

   Samtidig medicinering

   Generel:

   Al yderligere medicin, der tages af forsøgspersonerne ved indgangen til undersøgelsen eller på et hvilket som helst tidspunkt under undersøgelsen, betragtes som samtidig medicin og vil blive dokumenteret i kildedatafilen. Samtidig medicin bør holdes på et minimum under undersøgelsen, men hvis det anses for nødvendigt, kan det gives, hvis det ikke forstyrrer undersøgelsesprotokollen.

   Redningsmedicin:

   Selvom anafylaktiske hændelser er meget usandsynlige i denne undersøgelse, skal de altid betragtes som mulige. Derfor vil et komplet nødsæt være tilgængeligt med det samme i tilfælde af anafylaktiske reaktioner ved SPT eller nasal udfordring. Hvis patienten lider af næse- og øjensymptomer efter den intranasale provokation, vil der blive givet azelastin næsespray og/eller desloratadin 5 mg for at lindre symptomerne.

   Forbudt samtidig medicin:

   Forsøgspersoner skal holde sig fra medicin, der forstyrrer undersøgelsesprocedurerne, så længe undersøgelsen varer. Følgende samtidige behandlinger er ikke tilladt under denne undersøgelse:

   • Systemiske eller topiske kortikosteroider
   • Andre immunsuppressive lægemidler
   • Antihistaminer eller dinatriumkromoglycat 3 dage før besøg
   • Systemiske eller intranasale adrenerge lægemidler
   • Psykofarmakologiske lægemidler
   • ACE-hæmmere eller betablokkere

   Uønskede hændelser

   En uønsket hændelse er enhver hændelse under en klinisk undersøgelse, inklusive interkurrent sygdom eller ulykke, som forringer forsøgspersonens velbefindende; det kan også tage form af en unormal laboratorieværdi. Udtrykket uønsket hændelse indebærer ikke en årsagssammenhæng med undersøgelsesbehandlingen.

   Alle forsøgspersoner, der oplever uønskede hændelser - uanset om de anses for at være forbundet med brugen af ​​undersøgelsesbehandlingen eller ej - vil blive overvåget, indtil symptomerne aftager, og enhver unormal laboratorieværdi er vendt tilbage til baseline, eller indtil der er en tilfredsstillende forklaring på de observerede ændringer, eller indtil døden , i hvilket tilfælde en fuldstændig patologirapport fra en kvalificeret patolog vil blive leveret. Alle fund skal rapporteres på en "uønsket hændelse"-side i sagsjournalen.

   Alle uønskede hændelser vil blive rapporteret om og dokumenteret som beskrevet nedenfor. Bivirkninger er opdelt i kategorierne "alvorlige" og "ikke-alvorlige". Dette bestemmer den procedure, der skal anvendes til at rapportere/dokumentere den uønskede hændelse.

   Definition af alvorlige og ikke-alvorlige bivirkninger

   En alvorlig bivirkning er:

   • Enhver hændelse, der er dødelig eller livstruende
   • Enhver begivenhed, der er permanent deaktiverende
   • Enhver hændelse, der kræver eller forlænger hospitalsindlæggelse
   • Enhver hændelse, der involverer kræft, medfødt abnormitet eller opstår som følge af overdosering (anvendelse af mere end den fastsatte dosis).

   Bivirkninger, der ikke falder ind under disse kategorier, defineres som ikke-alvorlige.

   Vurdering af sværhedsgraden af ​​AE

   Uanset klassificeringen af ​​en uønsket hændelse som alvorlig eller ikke-alvorlig (se ovenfor), skal dens sværhedsgrad vurderes som mild, moderat eller alvorlig alene i henhold til medicinske kriterier:

   Mild = forstyrrer ikke rutineaktiviteter, acceptabel Moderat = forstyrrer rutineaktiviteter Alvorlig = umulig at udføre rutineaktiviteter, betragtes som uacceptabel af lægen, kræver behandling, kræver afbrydelse af undersøgelsen eller har resteffekt.

   Det skal bemærkes, at en alvorlig bivirkning ikke behøver at være alvorlig. Uanset sværhedsgrad skal alle alvorlige bivirkninger rapporteres som nedenfor.

   Indberetning/dokumentation af uønskede hændelser

   Bivirkninger indsamles ved spontan indberetning.

   Indberetning/dokumentation af alvorlige uønskede hændelser

   Alle alvorlige uønskede hændelser, der opstår i løbet af denne undersøgelse, uanset om de anses for at være forbundet med undersøgelsesmedicinen eller ej, skal dokumenteres på en side "Bivirkninger" i sagsjournalen.

   Der skal udarbejdes en opfølgningsrapport med alle indhentede nye oplysninger om den alvorlige hændelse, som vil blive indsamlet.

   Efterforskeren vil på anmodning indsende kopier af alle disse rapporter til den etiske komité. Hvor det er nødvendigt, vil efterforskerne informere myndighederne.

   Indberetning/dokumentation af ikke-alvorlige uønskede hændelser

   Disse skal dokumenteres på en side "Uønsket hændelse" i sagsjournalen.

   Statistisk analyse

   Da dette er et pilotstudie, betragtes den udførte analyse som eksplorativ og hypotesegenererende.

   Patientkarakteristika og udfaldsvariable vil blive beskrevet ved at beregne maksimum, minimum, median, middel og standardafvigelse for metriske variable og absolutte og relative frekvenser for kategoriske variable.

   For at analysere tidsbaner for IgE-niveauer og andre udfaldsvariable vil beskrivende statistik samt 95 % konfidensintervaller for gennemsnittet blive beregnet for hvert tidspunkt og hver behandlingsgruppe separat. For at tage højde for heterogene baseline-niveauer mellem patienter, vil de observerede resultater for hver patient blive standardiseret af de respektive baseline-værdier for disse analyser. Yderligere vil gennemsnitlige forskelle mellem grupper og i henhold til 95 % konfidensintervaller blive beregnet for hvert tidspunkt. Til grafisk illustration vil de individuelle forløb for hver patient blive plottet.

   De data, der blev observeret i hudpriktesten, består af en række allergendoser og de resulterende områdemålinger. Baseret på foreløbige data fra otte patienter i tidligere undersøgelse, blev en eksponentiel model af typen Area = A*(1-exp(-λ Dose) fundet til passende at beskrive dosis-respons-forholdet observeret i hudprikkestesten. Modellen vil være egnet til hvert tidspunkt i hver gruppe ved hjælp af en ikke-lineær mindste kvadraters algoritme. Fra disse modeller vil responsraten λ, plateauområdet A og den 50 % effektive dosis blive rapporteret sammen med 95 % konfidensintervaller.

   Hvis der mangler værdier, vil alle analyser blive udført på et tilgængeligt case-grundlag.

   Overvejelser om prøvestørrelse:

   I betragtning af undersøgelsens eksplorative karakter er overvejelserne om stikprøvestørrelse baseret på præcisionen af ​​parameterestimater. Det primære formål er analyse af IgE-niveauer på tværs af tid. Dato fra en tidligere undersøgelse viser en relativ stigning af anti-Bet v 1 IgE fire uger efter nasal provokation med Bet v 1 med en gennemsnitlig faktor på 1,4 og en standardafvigelse på ca. 0,5 mellem patienter. Med et kontrolantigen var middelfaktoren 1,04 med en standardafvigelse på ca. 0,25. Den maksimale statistiske præcision for en sammenligning af middelværdier mellem de to grupper opnås, hvis allokeringsforholdet er proportionalt med forholdet mellem standardafvigelser, som er 2:1 baseret på de tidligere data. Under ovenstående antagelser om effektstørrelser og standardafvigelser vil en samlet stikprøvestørrelse på 30 (20:10) give 95 % konfidensintervaller med en halv bredde på ca. 0,2 i begge grupper. Den forventede halvbredde af et 95 % konfidensinterval for den gennemsnitlige forskel mellem grupper er 0,28. (En tilsvarende t-test med to stikprøver ville have en styrke på 80 % til at detektere en gennemsnitlig forskel på 0,4 ved et 5 % signifikansniveau). Til analysen af ​​hudpriktesten tyder de foreløbige data på, at med en prøvestørrelse på 20 vil halvbredden af ​​95 % konfidensintervaller for den 50 % effektive dosis være ca. 0,25 gange den 50 % effektive dosis, som anses for at være som tilstrækkelig præcision til denne pilotundersøgelse. Se venligst bilag for grafisk fremstilling

   Etiske og juridiske aspekter

   Undersøgelsen vil blive udført i overensstemmelse med lokale lovkrav og GCP. Det vil blive udført i overensstemmelse med retningslinjerne i Helsinki-erklæringen (1964), herunder aktuelle revisioner.

   Informeret samtykke fra subjektet

   Inden optagelse i undersøgelsen, skal forsøgspersonen have givet sit samtykke til deltagelse, efter at arten, omfanget og de mulige konsekvenser af det kliniske forsøg er blevet forklaret i en for ham/hende forståelig form. Forsøgspersonen skal give skriftligt samtykke. Efterforskerens underskrift bekræfter forsøgspersonens samtykke. Patienten kan til enhver tid trække samtykket tilbage, selv uden at give kommentarer, uden negative konsekvenser for hans fremtidige lægebehandling.

   Anerkendelse/godkendelse af undersøgelsen

   Inden studiets start vil undersøgelsesprotokollen blive forelagt den etiske komité for det medicinske universitet i Wien og det generelle hospital i Wien (Borschkegasse 8b/E 06, 1090 Wien, Østrig).

   Forsikring

   Alle forsøgspersoner, der deltager i denne undersøgelse, vil være forsikret hos Zürich Insurance Company (Zürich-Versicherungs-Aktiengesellschaft, Schwarzenbergplatz 15, 1010 Wien, Tlf. +43 50 1255 1255; forsikringsnummer: 07229622-2).

   Fortrolighed

   Alle forsøgspersoners navne vil blive holdt hemmelige i efterforskernes filer. Forsøgspersoner vil blive identificeret i hele dokumentationen og evalueringen ved det antal, de har fået tildelt under undersøgelsen. Forsøgspersonerne vil få at vide, at alle undersøgelsesresultater vil blive opbevaret og håndteret strengt fortroligt.

   Dokumentation og brug af undersøgelsesresultater

   Dokumentation af undersøgelsesresultater

   Alle resultater indsamlet i løbet af undersøgelsen vil blive samlet i en kildedatafil og vil senere blive overført til case report forms (CRF'er). Alle indtastninger på sagsjournalen vil være læseligt med sort eller blå blæk. Hvis der rettes til indtastninger i sagsjournalen, vil ordene eller tallene blive ringet op, og der trækkes et enkelt streg igennem dem. Den korrekte værdi vil blive indtastet ved siden af ​​den gamle indtastning og dato, og rettelsen vil blive initialiseret. Forkerte indtastninger må ikke dækkes med korrektionsvæske eller udslettes eller gøres ulæselige på nogen måde. De udfyldte CRF'er vil blive underskrevet af investigator. CRF'er vil blive afsluttet umiddelbart efter den afsluttende eksamen. De lægejournaler, som CRF er baseret på, opbevares i mindst 15 år.

   Brug af undersøgelsens resultater

   Resultaterne af denne undersøgelse vil blive offentliggjort af efterforskerne i et videnskabeligt tidsskrift og præsenteret på videnskabelige møder. Manuskriptet vil blive rundsendt til alle medforskere inden indsendelse.