D-vitamin og dødelighed: en individuel deltagerdata-metaanalyse af standardiseret 25-hydroxyvitamin D

D-vitamin er involveret i reguleringen af ​​calciumhomeostase og udøver gavnlige virkninger på skeletets sundhed. Serumniveauer af 25-hydroxyvitamin D (25[OH]D) måles for at vurdere D-vitaminstatus, som hovedsageligt bestemmes af sollys (ultraviolet-B) induceret D-vitaminproduktion i huden og i mindre grad af diæt eller supplerende D-vitamin indtag. En dårlig D-vitaminstatus er dukket op som en risikofaktor for forskellige uønskede helbredsudfald, herunder dødelighed, men der er uenighed om klassificeringen af ​​D-vitaminstatus og formen af ​​sammenhængen mellem 25(OH)D-koncentrationer og dødelighed.

Eksisterende viden om D-vitaminstatus og dødelighed er begrænset af manglende standardisering af laboratoriemetoder. Tidligere undersøgelser har vist, at assay- og laboratorieforskelle har en signifikant indflydelse på de rapporterede 25(OH)D-koncentrationer og dermed på sammenhængen mellem 25(OH)D og sundhedsresultater. Derfor har Vitamin D Standardization Program (VDSP), et samarbejdsinitiativ ledet af National Institutes of Health-Office of Dietary Supplements (NIH-ODS), udviklet protokoller til standardisering af 25(OH)D-data fra nuværende og tidligere undersøgelser.

I dette arbejde, som er en del af EU-projektet 'Fødevarebaserede løsninger til udryddelse af D-vitaminmangel og sundhedsfremme gennem hele livscyklussen' (ODIN), sigter vi mod at adressere videnskløften om sammenhængen mellem standardiseret 25(OH) )D-koncentrationer og dødelighed i en kollaborativ metaanalyse ved hjælp af individuelle deltagerdata (IPD) fra otte studiekohorter i hele Europa. I detaljer vil vi studere sammenhænge mellem 25(OH)D med dødelighed af alle årsager, kardiovaskulær og cancer. Vi bruger en et-trins tilgang til denne meta-analyse, som har den fordel, at IPD fra alle undersøgelser modelleres samtidigt, mens konventionelle to-trins tilgange er baseret på aggregerede data fra hver enkelt undersøgelse. I betragtning af, at størstedelen af ​​de individuelle undersøgelser af denne meta-analyse allerede har rapporteret om originale 25(OH)D-data, sigter vi mod at sammenligne originale og standardiserede 25(OH)D-koncentrationer vedrørende forskelle i rapporterede koncentrationer og deres sammenhænge med dødelighed.

Metoder STUDIEIDENTIFIKATION & UDVÆLGELSE Vi etablerede et samarbejde for at udføre denne metaanalyse af IPD. Potentielle deltagere i en arbejdspakke af EU's syvende rammeprogram ODIN blev inviteret til at deltage i en en-dags workshop i Amsterdam i november 2012 for at diskutere mål, implementering og udvikling af opgaven. Inviterede europæisk-baserede deltagere blev identificeret på grundlag af for nylig offentliggjorte data fra store potentielle kohorter af D-vitamin med dødelighed og kardiovaskulære udfald. Der var en række forudsætninger for inddragelse af individuelle kohortestudier i ODIN: Det var nødvendigt at have kvalitets biobankede prøver til ensartet prøveudtagning og analyse af udvalgte prøver, validerede prospektive data om kliniske resultater, vilje til at samarbejde og ekspertise på området.

STUDIER & DELTAGERE Alle individuelle kohorter er en del af ODIN-konsortiet. Vi vil bruge IPD fra otte uafhængige prospektive kohortestudier fra Norge, Tyskland, Danmark, Holland og Island. Inkluderede undersøgelser er den 4. undersøgelse af Tromsø-undersøgelsen, Ludwigshafen Risk and Cardiovascular Health Study (LURIC), Age, Gene/Environment Susceptibility-Reykjavik Study (AGES), New Hoorn Study (NHS), Aarhus Mammography Cohort Study, den tyske sundhedsinterview og undersøgelsesundersøgelse for voksne (DEGS) og den gamle og unge kohorte af Longitudinal Study on Aging in Amsterdam (LASA). Alle kohorteundersøgelser blev udført i overensstemmelse med Helsinki-erklæringen, og der blev indhentet skriftligt informeret samtykke fra alle undersøgelsesdeltagere.

MÅLING AF 25(OH)D I henhold til VDSP-protokollen vil vi udføre en prøveudtagningsprocedure for at udvælge en delmængde af 100-150 biobankede serumprøver fra hver individuel kohorteundersøgelse til re-analyse af 25(OH)D ved en standardiseret og certificeret væskekromatografi-tandem massespektrometri (LC-tandem MS) metode, som kan spores til USA's National Institute of Standards and Technology (NIST) højere ordens referencemålingsprocedure. De genanalyserede 25(OH)D-værdier vil blive brugt til at udvikle master-regressionsligninger for alle nuværende kohortestudier og til at rekalibrere eksisterende 25(OH)D-målinger. NHS har ingen tidligere 25(OH)D-målinger og vil blive analyseret fuldt ud.

GRUPPERERING IPD-populationen vil blive opdelt i syv grupper i henhold til deres 25(OH)D-status ved baseline. Allokeringen af ​​individer i en af ​​de syv undergrupper vil blive udført for originale og standardiserede 25(OH)D-målinger.

Ifølge Institute of Medicine (IOM) rapport 2011 vil tærskler for 25(OH)D-grupper blive tildelt som alvorligt D-vitaminmangel (≤29•99 nmol/L), som to grupper af patienter med risiko for utilstrækkelighed (fra 30 til ≤ 39•99 nmol/L og 40 til ≤ 49•99 nmol/L), som D-vitamin tilstrækkeligt (fra 50 til ≤ 75 nmol/L), som to grupper af D-vitaminniveauer, der ikke konsekvent er forbundet med øget fordel (fra 75 til ≤ 99•99 nmol/L; fra 100 til ≤ 124•99 nmol/L) og så høje D-vitaminniveauer med grund til bekymring (≥ 125 nmol/L; at omdanne nmol/L til ng/mL dividere af 2•496).

STATISTISK ANALYSE Forskelle mellem originale og standardiserede 25(OH)D-koncentrationer vil blive vurderet ved en parret prøve t-test. Til sammenligninger af andre baseline-karakteristika på tværs af standardiserede D-vitamingrupper vil vi bruge ANOVA til kontinuerlig og χ2-test for kategoriske data, alt efter hvad der er relevant.

Dødelighed af alle årsager er det primære resultat og er tilgængelig i alle deltagende kohortestudier. Sekundære resultater er kardiovaskulær dødelighed og cancerdødelighed og er tilgængelige i alle kohortestudier undtagen NHS. Alle endepunkter blev søgt så detaljeret som muligt fra dødsattester, kommunale registre, lægejournaler og lokale myndigheder.

Alle udfaldsanalyser vil blive udført for originale og standardiserede 25(OH)D-værdier ved hjælp af IPD-meta-analyseestimater og undersøgelsesspecifikke estimater. Analyserne vil være baseret på personer med fuldstændige data om alder, køn, body mass index (BMI), sæson for blodprøvetagning, 25(OH)D niveauer, vital status ved opfølgning og opfølgningstidspunkt. Opfølgningstiden skal være > 0 dage. Deltagere med manglende data vil blive udelukket fra analysen, og vi udfører ingen dataimputation.

Forbindelser mellem 25(OH)D-niveauer og dødelighed af alle årsager vil blive estimeret ved hjælp af IPD i en et-trins tilgang. Generelt blev IPD-metaanalyser efter en et-trins procedure vist at være den mere kortfattede tilgang til binære resultater sammenlignet med den ofte anvendte to-trins tilgang, hvor aggregerede data blev analyseret. Vi vil bruge en hierarkisk, parametrisk overlevelsesmodel, som er mere gennemførlig sammenlignet med en Cox-model, når vi analyserer binære resultater. Den enkelte ligning vil blive behandlet i en parametrisk, accelereret fejltid (AFT) Weibull-model, som så ud til at passe bedst til de underliggende data mod eksponentielle, log-logistiske og log-normale fordelinger. Modellen vil blive bygget ved hjælp af SAS PROC NLMIXED (SAS Institute Inc., 100 SAS Campus Drive, Cary, USA) og tilfældig intercept for at tage højde for tilfældige effekter på tværs af kohortestudier.

Til mortalitetsanalyserne vil 25(OH)D blive modelleret ved hjælp af 1) en traditionel kategorisk variabel tilgang med grupper i henhold til den tidligere nævnte IOM-klassifikation og 2) en begrænset cubic splines tilgang. Cubic-splines-tilgangen blev valgt for at bevare den kontinuerlige natur af 25(OH)D-værdier og for at beregne hazard ratios (HRs) med 95 % konfidensintervaller (CI) ved middelværdien af ​​hver gruppe. Vi valgte 25(OH)D-gruppen med den laveste dødelighedsrisiko som reference. Vores resultatanalyser vil blive kumulativt justeret for risikofaktorer for dødelighed og determinanter for D-vitaminstatus. I model 1 justerer vi for alder (i år), køn (mand/kvinde) og sæson for blodopsamling (forår, sommer, efterår, vinter). I model 2, vores vigtigste statistiske model, justerer vi desuden for BMI (i kg/m²). I model 3 justerer vi desuden for diabetes mellitus (ja/nej) og arteriel hypertension (ja/nej), og i model 4 tilføjer vi kræfthistorie (ja/nej), historik med hjertekarsygdomme (ja/nej) og aktuelle rygestatus som kovariater (ja/nej).

Yderligere justeringer har model to som referencemodel. Yderligere justeringskovariater er ikke tilgængelige i alle kohorteundersøgelser, så yderligere justeringer vil kun blive udført i de undersøgelser, der kan give disse kovariater.

Først vil supplerende indtag af calcium (ja/nej) blive tilføjet til model to. Den første yderligere justeringsanalyse vil blive udført i alle undersøgelser, men DEGS og LASA, ung kohorte, da der ikke er tilgængelig information om supplerende brug.

For det andet vil supplerende indtagelse af D-vitamin (ja/nej) blive tilføjet til model to i alle undersøgelser undtagen LASA, gammel og ung kohorte og DEGS, da der ikke er nogen information om supplerende brug af D-vitamin tilgængelig i disse undersøgelser.

For det tredje vil yderligere justering af model to for fysisk aktivitet (tre dummy-variable for lav, middel og høj frekvens af fysisk aktivitet) blive behandlet i alle undersøgelser undtagen den aarhusianske mammografikohorte. Til sensitivitetsanalyse vil vi også udelade DEGS, da deltagerne i DEGS har en høj andel af unge, fysisk aktive individer.

For det fjerde vil justering for estimeret glomerulær filtrationshastighed (eGFR; i ml/min/1•73m²) blive tilføjet til model to. eGFR vil blive beregnet ud fra kreatinin ved baselinebesøg i henhold til undersøgelsesligningen med fire variable modifikation af diæt ved nyresygdom (MDRD) og vil blive tilføjet til model to i alle undersøgelser undtagen NHS, da ingen kreatininmålinger er tilgængelige i NHS.

I en femte analyse vil justering for parathyreoideahormon (i pmol/L) blive tilføjet til model to i alle studier undtagen NHS, Aarhus mammografikohorte og LASA, ung kohorte.

I en sjette analyse vil justering for C-reaktivt protein (i mg/L) blive tilføjet til model to i alle studier undtagen NHS, Aarhus mammografikohorte og LASA, ung kohorte.

I en syvende analyse vil justering for systolisk blodtryk (i mm Hg) blive tilføjet til model to i alle undersøgelser undtagen Aarhus mammografikohorten og DEGS.

I en ottende analyse vil justering for lavdensitetslipoproteinkolesterol (i mmol/L) blive tilføjet til model to i alle undersøgelser undtagen Aarhus mammografikohorten og DEGS.

I en niende analyse vil justering for glukose (i mmol/L) blive tilføjet til model to i alle undersøgelser undtagen Tromsø-undersøgelsen, Aarhus mammografikohorte og DEGS.

Alle modeller på original 25(OH)D vil blive udført uden NHS, da NHS ikke havde nogen originale 25(OH)D målinger. For standardiseret 25(OH)D vil vi beregne alle modeller 1) med data fra NHS og 2) uden data fra NHS for at give sammenlignelige resultater mellem modeller af originale og standardiserede 25(OH)D målinger.

Sensitivitetsanalyser Undergruppeanalyser vil blive udført for at stratificere for risikofaktorer for D-vitaminmangel og dødelighed. I detaljer stratificerede vi for køn (kvinder/mænd), aldersgrupper (<60 år; 60 til 69•9 år; 70+ år), BMI-grupper (<25 kg/m²; 25<30 kg/m²; ≥30 kg /m²), calciumtilskud (ja/nej), D-vitamintilskud (ja/nej), historie med CVD (ja/nej) og historie med kræft (ja/nej). En yderligere følsomhedsanalyse vil være begrænset til individer, der døde > 1 år og > 3 år efter baselineundersøgelse og begrænset til generelle befolkningskohorter (dvs. alle kohorter undtagen LURIC).

Sekundære udfald For at vurdere sekundære udfald af kardiovaskulær dødelighed og cancerdødelighed bruger vi traditionelle Cox proportionale farer og den modificerede risikoregression i henhold til metoden Fine og Grey til at tage højde for konkurrerende risici. Kort sagt, proportionale farer er muligvis ikke opfyldt i multicenter-miljøer, så baseline-farer har lov til at variere på tværs af enkeltkohorteundersøgelser.