Forbedring af immunologiske og molekylære teknikker til diagnosticering og opfølgning af patienter med trombotisk trombocytopenisk purpura

Manglen på ADAMTS13 er den eneste biologiske markør, der er specifik for aTTP-diagnose8, og vurderingen af ​​ADAMTS13 er af klinisk betydning, fordi den er afgørende for den hurtige differentialdiagnose mellem aTTP og anden TMA. Ydermere er overvågning af ADAMTS13-aktivitet nyttig for at sikre biologisk remission (ADAMTS13-niveauer > 10%) samt forudsigelse af tilbagefald.

På grund af den høje dødelighed af aTTP bør behandlingen påbegyndes, så snart der er mistanke om sygdommen, nogle gange endda før bekræftelse med ADAMTS13-testresultaterne. Denne situation kan føre til fejldiagnosticering af nogle patienter og efterlade dem uden den passende behandling. Som konklusion er ADAMTS13-aktivitetsassay afgørende for en tidlig diagnose og optimal håndtering af akut aTTP, og enhver forsinkelse i ADAMTS13-resultater vil have en negativ indvirkning på patientens diagnose, behandling og prognose.

Der er i øjeblikket 2 tilgængelige teknikker til ADAMTS13-aktivitetsbestemmelsen, fluorescensresonansenergioverførsel (FRET) og Technozym-chromogenic enzym-linked immunosorbent assay (ELISA). Begge betragtes som referencemetoder, men de kræver betydelige færdigheder, fordi de er meget manuelle, og det øger risikoen for fejl. Desuden er disse metoder tidskrævende, ikke bredt tilgængelige, og i tilfælde af ELISA-metoden kræver det en ny kalibrering ved hver kørsel. Variabiliteten mellem laboratorier er også en udfordring, og derfor kan det være nødvendigt med en validerings- og/eller fortolkningsmetode.

For nylig er en ny og første fuldautomatisk HemosIL AcuStar ADAMTS13 aktivitetsanalyse (Instrumentation Laboratory, Bedford, Massachusetts, USA) blevet udviklet. HemosIL AcuStar ADAMTS13 aktivitetsassay er en to-trins kemiluminescerende immunoassay (CLIA) med en analytisk tid på 33 minutter til kvantitativ måling af ADAMTS13 aktivitet i human-citrat plasma på ACL AcuStar analysator. Immunoassayet bruger GST-VWF73-substratet i kombination med magnetiske partikler til hurtig adskillelse og kemiluminescensteknologidetektion. ADAMTS13, der er til stede i plasmaprøven, spalter GST-VWF73-substratet, og påvisningen af ​​de genererede fragmenter er baseret på et isoluminol-mærket monoklonalt antistof, der specifikt reagerer med det spaltede peptid. Det udsendte lys er proportional med ADAMTS13-aktiviteten i prøven.

Denne nye ADAMTS13-analysemetode er blevet sammenlignet med de to andre tilgængelige teknikker i to forskellige undersøgelser. For det første, Favresse et al. offentliggjort resultaterne af sammenligningen mellem Technozym aktivitet ELISA assay og den nye HemosIL AcuStar kemiluminescerende assay. På den anden side har Valsecchi et al. har for nylig offentliggjort resultaterne af validering af denne nye teknik i sammenligning med ELISA og FRETS i 176 prøver. Begge undersøgelser konkluderer, at det nye kemiluminescerende ADAMTS13-aktivitetsassay viste en god korrelation og fremragende klinisk ydeevne til diagnosticering af alvorlig ADAMTS13-mangel med FRETS-VWF73-analysen og en kommerciel ELISA, når man kun overvejede ADAMTS13-aktivitetsværdier under 10 % (den internationalt accepterede cut- off for en diagnose af svær ADAMTS13-mangel, typisk for aTTP). Endelig har Stratmann et al. har netop publiceret en anden undersøgelse, der sammenligner HemosIL AcuStar kemiluminescerende assay med to kommercielt tilgængelige ADAMTS13 assay kits ved hjælp af 24 parrede testprøver afledt af 10 fortløbende rekrutterede patienter13, og deres resultater bekræfter de tidligere publicerede data, der tyder på, at AcuStar assayet kunne være et værdifuldt og præcist værktøj til ADAMTS13 aktivitetstest og aTTP-diagnostik.

I denne sammenhæng genereres en unik mulighed for at validere denne nye teknik, både retrospektivt med vores allerede tilgængelige data fra frosne prøver og også i forbindelse med en stor prospektiv undersøgelse. Dette vil være den første verdensomspændende undersøgelse, der tester HemosIL AcuStar-metoden i reel klinisk praksis aTTP-population (spanske og portugisiske aTTP-populationer) med det formål at standardisere diagnose- og opfølgningsmetoden for sygdommen.