Immunologisten ja molekulaaristen tekniikoiden parantaminen tromboottista trombosytopeenista purppuraa sairastavien potilaiden diagnosointiin ja seurantaan

ADAMTS13:n puute on ainoa biologinen markkeri, joka on spesifinen aTTP-diagnoosille8, ja ADAMTS13:n arvioinnilla on kliinistä merkitystä, koska se on välttämätön nopealle erotusdiagnoosille aTTP:n ja muun TMA:n välillä. Lisäksi ADAMTS13-aktiivisuuden seuranta on hyödyllistä varmistaa biologinen remissio (ADAMTS13-tasot > 10 %) sekä ennakoida pahenemisvaiheita.

ATTP:n korkean kuolleisuuden vuoksi hoito tulee aloittaa heti, kun tautia epäillään, joskus jopa ennen vahvistusta ADAMTS13-testin tuloksilla. Tämä tilanne voi johtaa siihen, että jotkut potilaat diagnosoivat väärin ja jättävät heidät ilman asianmukaista hoitoa. Yhteenvetona voidaan todeta, että ADAMTS13-aktiivisuusmääritys on ratkaisevan tärkeä akuutin aTTP:n varhaisessa diagnosoinnissa ja optimaalisessa hallinnassa, ja kaikki ADAMTS13-tulosten viivästymiset vaikuttavat negatiivisesti potilaan diagnoosiin, hoitoon ja ennusteeseen.

ADAMTS13-aktiivisuuden määritykseen on tällä hetkellä saatavilla kaksi tekniikkaa, fluoresenssiresonanssienergian siirto (FRET) ja Technozym kromogeeninen entsyymi-immunosorbenttimääritys (ELISA). Molempia pidetään vertailumenetelminä, mutta ne vaativat huomattavaa taitoa, koska ne ovat erittäin manuaalisia ja tämä lisää virheriskiä. Lisäksi nämä menetelmät ovat aikaa vieviä, niitä ei ole laajalti saatavilla ja ELISA-menetelmän tapauksessa se vaatii uuden kalibroinnin joka ajossa. Laboratorioiden välinen vaihtelu on myös haaste, ja siksi validointi- ja/tai tulkintamenetelmä saattaa olla tarpeen.

Äskettäin on kehitetty uusi ja ensimmäinen täysin automatisoitu HemosIL AcuStar ADAMTS13 Activity -määritys (Instrumentation Laboratory, Bedford, Massachusetts, Yhdysvallat). HemosIL AcuStar ADAMTS13 Activity Assay on kaksivaiheinen kemiluminesenssi-immunomääritys (CLIA), jonka analyyttinen aika on 33 minuuttia ADAMTS13-aktiivisuuden kvantitatiiviseen mittaamiseen ihmisen sitroidussa plasmassa ACL AcuStar -analysaattorilla. Immunomääritys käyttää GST-VWF73-substraattia yhdessä magneettisten hiukkasten kanssa nopeaan erottamiseen ja kemiluminesenssiteknologian havaitsemiseen. Plasmanäytteessä läsnä oleva ADAMTS13 katkaisee GST-VWF73-substraatin ja muodostuneiden fragmenttien havaitseminen perustuu isoluminolileimaukseen monoklonaaliseen vasta-aineeseen, joka reagoi spesifisesti pilkotun peptidin kanssa. Säteilevä valo on verrannollinen ADAMTS13-aktiivisuuteen näytteessä.

Tätä uutta ADAMTS13-määritysmenetelmää on verrattu kahteen muuhun saatavilla olevaan tekniikkaan kahdessa eri tutkimuksessa. Ensinnäkin Favresse et ai. julkaisi tulokset Technozym-aktiivisuus ELISA -määrityksen ja uuden HemosIL AcuStar -kemiluminesenssianalyysin välisestä vertailusta. Toisaalta Valsecchi et ai. ovat äskettäin julkaisseet tulokset tämän uuden tekniikan validoinnista verrattuna ELISAan ja FRETSiin 176 näytteessä. Molemmat tutkimukset päättelevät, että uusi kemiluminesoiva ADAMTS13-aktiivisuusmääritys osoitti hyvän korrelaation ja erinomaisen kliinisen suorituskyvyn vakavan ADAMTS13-puutoksen diagnosoinnissa FRETS-VWF73-määrityksen ja kaupallisen ELISA-testin kanssa, kun otetaan huomioon vain ADAMTS13-aktiivisuusarvot alle 10 % (kansainvälisesti hyväksytty raja-arvo). pois aTTP:lle tyypillisen vakavan ADAMTS13-puutosdiagnoosin vuoksi). Lopuksi Stratmann et ai. ovat juuri julkaisseet toisen tutkimuksen, jossa verrataan HemosIL AcuStar -kemiluminesenssimääritystä kahteen kaupallisesti saatavilla olevaan ADAMTS13-määrityssarjaan käyttäen 24 parillista testinäytettä, jotka on saatu 10 peräkkäin värvätystä potilaasta13, ja niiden tulokset tukevat aiemmin julkaistuja tietoja, jotka viittaavat siihen, että AcuStar-määritys voisi olla arvokas ja tarkka työkalu ADAMTS13-aktiivisuustestaus ja aTTP-diagnostiikka.

Tässä yhteydessä syntyy ainutlaatuinen tilaisuus validoida tämä uusi tekniikka, sekä takautuvasti jo saatavilla olevien jäädytettyjen näytteiden tiedoillamme että myös suuren prospektiivisen tutkimuksen yhteydessä. Tämä on ensimmäinen tutkimus maailmanlaajuisesti, jossa HemosIL AcuStar -menetelmää testataan todellisessa kliinisessä käytännössä aTTP-populaatiossa (espanjalaiset ja portugalilaiset aTTP-populaatiot) tavoitteena standardoida taudin diagnoosi- ja seurantamenetelmät.