Verbesserung immunologischer und molekularer Techniken zur Diagnose und Nachsorge von Patienten mit thrombotischer thrombozytopenischer Purpura

Das Fehlen von ADAMTS13 ist der einzige biologische Marker, der spezifisch für die aTTP-Diagnose ist8, und die Beurteilung von ADAMTS13 ist von klinischer Bedeutung, da es für die schnelle Differenzialdiagnose zwischen aTTP und anderen TMA unerlässlich ist. Darüber hinaus ist die Überwachung der ADAMTS13-Aktivität nützlich, um eine biologische Remission (ADAMTS13-Spiegel > 10 %) sicherzustellen und Rückfälle vorherzusagen.

Aufgrund der hohen Sterblichkeitsrate von aTTP sollte die Behandlung begonnen werden, sobald der Verdacht auf die Erkrankung besteht, manchmal sogar vor der Bestätigung durch die ADAMTS13-Testergebnisse. Diese Situation kann dazu führen, dass einige Patienten eine Fehldiagnose stellen und keine angemessene Behandlung erhalten. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass der ADAMTS13-Aktivitätstest für eine frühe Diagnose und optimale Behandlung von akutem aTTP von entscheidender Bedeutung ist und jede Verzögerung der ADAMTS13-Ergebnisse negative Auswirkungen auf die Diagnose, Behandlung und Prognose des Patienten haben wird.

Für die ADAMTS13-Aktivitätsbestimmung stehen derzeit zwei Techniken zur Verfügung: der Fluoreszenzresonanzenergietransfer (FRET) und der chromogene Enzymimmunoassay (ELISA) von Technozym. Beide gelten als Referenzmethoden, erfordern jedoch erhebliches Fachwissen, da sie sehr manuell sind und dadurch das Fehlerrisiko steigen. Darüber hinaus sind diese Methoden zeitaufwändig, nicht allgemein verfügbar und erfordern im Falle der ELISA-Methode bei jedem Lauf eine neue Kalibrierung. Die Variabilität zwischen Laboren stellt ebenfalls eine Herausforderung dar und daher könnte eine Validierungs- und/oder Interpretationsmethode erforderlich sein.

Kürzlich wurde ein neuer und erster vollautomatischer HemosIL AcuStar ADAMTS13-Aktivitätstest (Instrumentation Laboratory, Bedford, Massachusetts, USA) entwickelt. Der HemosIL AcuStar ADAMTS13-Aktivitätstest ist ein zweistufiger Chemilumineszenz-Immunoassay (CLIA) mit einer Analysezeit von 33 Minuten für die quantitative Messung der ADAMTS13-Aktivität in humanem Citratplasma auf dem ACL AcuStar-Analysegerät. Der Immunoassay nutzt das GST-VWF73-Substrat in Kombination mit magnetischen Partikeln für eine schnelle Trennung und den Nachweis mittels Chemilumineszenz-Technologie. Das in der Plasmaprobe vorhandene ADAMTS13 spaltet das GST-VWF73-Substrat und der Nachweis der erzeugten Fragmente basiert auf einem Isoluminol-markierten monoklonalen Antikörper, der spezifisch mit dem gespaltenen Peptid reagiert. Das emittierte Licht ist proportional zur ADAMTS13-Aktivität in der Probe.

Diese neue ADAMTS13-Testmethode wurde in zwei verschiedenen Studien mit den beiden anderen verfügbaren Techniken verglichen. Erstens haben Favresse et al. veröffentlichte die Ergebnisse des Vergleichs zwischen dem Technozym-Aktivitäts-ELISA-Assay und dem neuen HemosIL AcuStar Chemilumineszenz-Assay. Andererseits haben Valsecchi et al. haben kürzlich die Ergebnisse der Validierung dieser neuen Technik im Vergleich zu ELISA und FRETS in 176 Proben veröffentlicht. Beide Studien kommen zu dem Schluss, dass der neue chemilumineszierende ADAMTS13-Aktivitätstest eine gute Korrelation und eine hervorragende klinische Leistung für die Diagnose eines schweren ADAMTS13-Mangels mit dem FRETS-VWF73-Test und einem kommerziellen ELISA zeigte, wenn nur ADAMTS13-Aktivitätswerte unter 10 % (der international anerkannte Grenzwert) berücksichtigt wurden. wegen der Diagnose eines schweren ADAMTS13-Mangels, der typisch für aTTP ist). Schließlich haben Stratmann et al. haben gerade eine weitere Studie veröffentlicht, in der der HemosIL AcuStar Chemilumineszenz-Assay mit zwei im Handel erhältlichen ADAMTS13-Assay-Kits verglichen wird. Dabei wurden 24 gepaarte Testproben von 10 nacheinander rekrutierten Patienten verwendet13 und ihre Ergebnisse bestätigen die zuvor veröffentlichten Daten, die darauf hindeuten, dass der AcuStar-Assay ein wertvolles und genaues Werkzeug für sein könnte ADAMTS13-Aktivitätstest und aTTP-Diagnose.

In diesem Zusammenhang ergibt sich eine einzigartige Gelegenheit zur Validierung dieser neuen Technik, sowohl retrospektiv mit unseren bereits verfügbaren Daten aus gefrorenen Proben als auch im Rahmen einer großen prospektiven Studie. Dies wird weltweit die erste Studie sein, in der die HemosIL AcuStar-Methode in der realen klinischen Praxis einer aTTP-Population (spanische und portugiesische aTTP-Populationen) getestet wird, mit dem Ziel, die Diagnose- und Nachsorgemethodik für die Krankheit zu standardisieren.