Doskonalenie technik immunologicznych i molekularnych w diagnostyce i obserwacji pacjentów z zakrzepową plamicą małopłytkową

Brak ADAMTS13 jest jedynym markerem biologicznym specyficznym dla rozpoznania aTTP8, a ocena ADAMTS13 ma znaczenie kliniczne, ponieważ jest niezbędna do szybkiej diagnostyki różnicowej między aTTP a innymi TMA. Ponadto monitorowanie aktywności ADAMTS13 jest przydatne w zapewnieniu remisji biologicznej (stężenia ADAMTS13 > 10%), jak również w przewidywaniu nawrotów.

Ze względu na dużą śmiertelność aTTP leczenie należy rozpocząć zaraz po podejrzeniu choroby, czasem nawet przed potwierdzeniem wynikami testu ADAMTS13. Taka sytuacja może prowadzić do błędnej diagnozy niektórych pacjentów i pozostawienia ich bez odpowiedniego leczenia. Podsumowując, test aktywności ADAMTS13 ma kluczowe znaczenie dla wczesnej diagnozy i optymalnego leczenia ostrego aTTP, a każde opóźnienie w wynikach ADAMTS13 będzie miało negatywny wpływ na diagnozę, leczenie i rokowanie pacjenta.

Obecnie dostępne są 2 techniki oznaczania aktywności ADAMTS13, transfer energii rezonansu fluorescencji (FRET) i chromogenny test immunoenzymatyczny (ELISA) Technozym. Obie są uważane za metody referencyjne, ale wymagają znacznych umiejętności, ponieważ są wysoce manualne, co zwiększa ryzyko błędu. Ponadto metody te są czasochłonne, mało dostępne, aw przypadku metody ELISA wymagają ponownej kalibracji przy każdym przebiegu. Zmienność międzylaboratoryjna jest również wyzwaniem i dlatego może być potrzebna metoda walidacji i/lub interpretacji.

Niedawno opracowano nowy i pierwszy w pełni zautomatyzowany test aktywności HemosIL AcuStar ADAMTS13 (Instrumentation Laboratory, Bedford, Massachusetts, Stany Zjednoczone). Test aktywności HemosIL AcuStar ADAMTS13 to dwuetapowy chemiluminescencyjny test immunologiczny (CLIA) z czasem analitycznym wynoszącym 33 minuty do ilościowego pomiaru aktywności ADAMTS13 w ludzkim osoczu z cytrynianem na analizatorze ACL AcuStar. Test immunologiczny wykorzystuje substrat GST-VWF73 w połączeniu z cząstkami magnetycznymi do szybkiego rozdzielania i wykrywania technologii chemiluminescencji. ADAMTS13 obecny w próbce osocza rozszczepia substrat GST-VWF73, a wykrywanie wytworzonych fragmentów opiera się na przeciwciałach monoklonalnych znakowanych izoluminolem, które specyficznie reagują z rozszczepionym peptydem. Emitowane światło jest proporcjonalne do aktywności ADAMTS13 w próbce.

Ta nowa metoda oznaczania ADAMTS13 została porównana z dwiema pozostałymi dostępnymi technikami w dwóch różnych badaniach. Po pierwsze, Favresse i in. opublikował wyniki porównania testu ELISA aktywności Technozym i nowego testu chemiluminescencyjnego HemosIL AcuStar. Z drugiej strony Valsecchi i in. niedawno opublikowali wyniki walidacji tej nowej techniki w porównaniu z ELISA i FRETS w 176 próbkach. Z obu badań wynika, że ​​nowy chemiluminescencyjny test aktywności ADAMTS13 wykazał dobrą korelację i doskonałą skuteczność kliniczną w diagnostyce ciężkiego niedoboru ADAMTS13 z testem FRETS-VWF73 i komercyjnym testem ELISA, biorąc pod uwagę tylko wartości aktywności ADAMTS13 poniżej 10% (akceptowana międzynarodowo metoda cięcia off dla diagnozy ciężkiego niedoboru ADAMTS13 typowego dla aTTP). Wreszcie Stratmann i in. właśnie opublikowali inne badanie porównujące test chemiluminescencyjny HemosIL AcuStar z dwoma dostępnymi na rynku zestawami testowymi ADAMTS13 wykorzystującymi 24 sparowane próbki testowe pochodzące od 10 kolejno rekrutowanych pacjentów13, a ich wyniki potwierdzają wcześniej opublikowane dane sugerujące, że test AcuStar może być cennym i dokładnym narzędziem do Testowanie aktywności ADAMTS13 i diagnostyka aTTP.

W tym kontekście powstaje wyjątkowa okazja do walidacji tej nowej techniki, zarówno retrospektywnie z naszymi już dostępnymi danymi z zamrożonych próbek, jak i w kontekście dużego badania prospektywnego. Będzie to pierwsze na świecie badanie testujące metodę HemosIL AcuStar w rzeczywistej praktyce klinicznej populacji aTTP (populacja hiszpańska i portugalska aTTP) w celu ujednolicenia metodologii diagnozowania i obserwacji choroby.