Forbedring av immunologiske og molekylære teknikker for diagnostisering og oppfølging av pasienter med trombotisk trombocytopenisk purpura

Mangelen på ADAMTS13 er den eneste biologiske markøren som er spesifikk for aTTP-diagnose8 og vurderingen av ADAMTS13 er av klinisk betydning fordi den er avgjørende for rask differensialdiagnose mellom aTTP og annen TMA. Videre er overvåking av ADAMTS13-aktivitet nyttig for å sikre biologisk remisjon (ADAMTS13-nivåer > 10%) samt forutsi tilbakefall.

På grunn av den høye dødeligheten av aTTP, bør behandlingen startes så snart sykdommen mistenkes, noen ganger til og med før bekreftelse med ADAMTS13-testresultatene. Denne situasjonen kan føre til feildiagnostisering av enkelte pasienter og etterlate dem uten riktig behandling. Konklusjonen er at ADAMTS13-aktivitetsanalysen er avgjørende for en tidlig diagnose og optimal håndtering av akutt aTTP, og enhver forsinkelse i ADAMTS13-resultater vil ha en negativ innvirkning på diagnosen, behandlingen og prognosen til pasienten.

Det er for tiden 2 teknikker tilgjengelig for ADAMTS13 aktivitetsbestemmelse, fluorescensresonansenergioverføring (FRET) og Technozym kromogene enzymkoblede immunosorbentanalyse (ELISA). Begge regnes som referansemetoder, men de krever betydelig dyktighet fordi de er svært manuelle og dette øker risikoen for feil. Videre er disse metodene tidkrevende, ikke allment tilgjengelige, og i tilfelle ELISA-metoden krever den en ny kalibrering ved hver kjøring. Variabiliteten mellom laboratorier er også en utfordring, og derfor kan det være behov for en validerings- og/eller tolkningsmetode.

Nylig har en ny og første helautomatisert HemosIL AcuStar ADAMTS13 aktivitetsanalyse (Instrumentation Laboratory, Bedford, Massachusetts, USA) blitt utviklet. HemosIL AcuStar ADAMTS13 aktivitetsanalyse er en to-trinns kjemiluminescent immunoassay (CLIA) med en analytisk tid på 33 minutter for kvantitativ måling av ADAMTS13-aktivitet i human-sitrert plasma på ACL AcuStar-analysatoren. Immunanalysen bruker GST-VWF73-substratet i kombinasjon med magnetiske partikler for rask separasjon og deteksjon av kjemiluminescensteknologi. ADAMTS13 tilstede i plasmaprøven spalter GST-VWF73-substratet og påvisningen av de genererte fragmentene er basert på et isoluminol-merket monoklonalt antistoff som spesifikt reagerer med det spaltede peptidet. Det utsendte lyset er proporsjonalt med ADAMTS13-aktiviteten i prøven.

Denne nye ADAMTS13-analysemetoden har blitt sammenlignet med de to andre tilgjengelige teknikkene i to forskjellige studier. Først, Favresse et al. publiserte resultatene av sammenligningen mellom Technozym-aktivitet ELISA-analysen og den nye HemosIL AcuStar kjemiluminescerende analysen. På den annen side har Valsecchi et al. har nylig publisert resultatene av validering av denne nye teknikken sammenlignet med ELISA og FRETS i 176 prøver. Begge studiene konkluderer med at den nye kjemiluminescerende ADAMTS13-aktivitetsanalysen viste en god korrelasjon og utmerket klinisk ytelse for diagnostisering av alvorlig ADAMTS13-mangel med FRETS-VWF73-analysen og en kommersiell ELISA når man kun vurderer ADAMTS13-aktivitetsverdier under 10 % (den internasjonalt aksepterte kutt- av for en diagnose av alvorlig ADAMTS13-mangel som er typisk for aTTP). Til slutt, Stratmann et al. har nettopp publisert en annen studie som sammenligner HemosIL AcuStar kjemiluminescensanalyse med to kommersielt tilgjengelige ADAMTS13-analysesett ved bruk av 24 parede testprøver fra 10 fortløpende rekrutterte pasienter13, og resultatene deres bekrefter de tidligere publiserte dataene som antyder at AcuStar-analysen kan være et verdifullt og nøyaktig verktøy for ADAMTS13 aktivitetstesting og aTTP-diagnostikk.

I denne sammenhengen genereres en unik mulighet til å validere denne nye teknikken, både retrospektivt med våre allerede tilgjengelige data fra frosne prøver og også i sammenheng med en stor prospektiv studie. Dette vil være den første verdensomspennende studien som tester HemosIL AcuStar-metoden i reell klinisk praksis aTTP-populasjon (spanske og portugisiske aTTP-populasjoner) med sikte på å standardisere diagnose- og oppfølgingsmetodikken for sykdommen.