Aperfeiçoamento de Técnicas Imunológicas e Moleculares para Diagnóstico e Acompanhamento de Pacientes com Púrpura Trombocitopênica Trombótica

A falta de ADAMTS13 é o único marcador biológico específico para o diagnóstico de aTTP8 e a avaliação de ADAMTS13 é de importância clínica porque é essencial para o rápido diagnóstico diferencial entre aTTP e outros TMA. Além disso, o monitoramento da atividade de ADAMTS13 é útil para garantir a remissão biológica (níveis de ADAMTS13 > 10%), bem como prever recaídas.

Devido à alta taxa de mortalidade do aTTP, o tratamento deve ser iniciado assim que houver suspeita da doença, às vezes antes mesmo da confirmação com o resultado do teste ADAMTS13. Essa situação pode levar ao diagnóstico incorreto de alguns pacientes e deixá-los sem o tratamento adequado. Em conclusão, o ensaio de atividade ADAMTS13 é crucial para um diagnóstico precoce e gerenciamento ideal de aTTP agudo e qualquer atraso nos resultados ADAMTS13 terá um impacto negativo no diagnóstico, tratamento e prognóstico do paciente.

Existem atualmente 2 técnicas disponíveis para a determinação da atividade de ADAMTS13, a transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET) e o ensaio imunoenzimático cromogênico Technozym (ELISA). Ambos são considerados métodos de referência, mas exigem considerável habilidade, pois são altamente manuais e isso aumenta o risco de erro. Além disso, esses métodos são demorados, não estão amplamente disponíveis e, no caso do método ELISA, requerem uma nova calibração a cada execução. A variabilidade interlaboratorial também é um desafio e, portanto, um método de validação e/ou interpretação pode ser necessário.

Recentemente, foi desenvolvido um novo e primeiro ensaio de atividade HemosIL AcuStar ADAMTS13 totalmente automatizado (Instrumentation Laboratory, Bedford, Massachusetts, Estados Unidos). O ensaio de atividade HemosIL AcuStar ADAMTS13 é um imunoensaio quimioluminescente (CLIA) de duas etapas com um tempo analítico de 33 minutos para a medição quantitativa da atividade de ADAMTS13 em plasma citratado humano no analisador ACL AcuStar. O imunoensaio usa o substrato GST-VWF73 em combinação com partículas magnéticas para rápida separação e detecção por quimioluminescência. O ADAMTS13 presente na amostra de plasma cliva o substrato GST-VWF73 e a detecção dos fragmentos gerados é baseada em um anticorpo monoclonal marcado com isoluminol que reage especificamente com o peptídeo clivado. A luz emitida é proporcional à atividade de ADAMTS13 na amostra.

Este novo método de ensaio ADAMTS13 foi comparado com as outras duas técnicas disponíveis em dois estudos diferentes. Primeiro, Favresse et al. publicaram os resultados da comparação entre o ensaio ELISA de atividade Technozym e o novo ensaio quimioluminescente HemosIL AcuStar. Por outro lado, Valsecchi et al. publicaram recentemente os resultados da validação desta nova técnica em comparação com ELISA e FRETS em 176 amostras. Ambos os estudos concluem que o novo ensaio quimioluminescente de atividade ADAMTS13 apresentou boa correlação e excelente desempenho clínico para o diagnóstico de deficiência grave de ADAMTS13 com o ensaio FRETS-VWF73 e um ELISA comercial ao considerar apenas valores de atividade ADAMTS13 abaixo de 10% (o limite internacionalmente aceito desligado para um diagnóstico de deficiência grave de ADAMTS13 típica de aTTP). Finalmente, Stratmann et al. acabaram de publicar outro estudo comparando o ensaio quimioluminescente HemosIL AcuStar com dois kits de ensaio ADAMTS13 disponíveis comercialmente usando 24 amostras de teste pareadas derivadas de 10 pacientes recrutados consecutivamente13 e seus resultados corroboram os dados publicados anteriormente sugerindo que o ensaio AcuStar pode ser uma ferramenta valiosa e precisa para Teste de atividade ADAMTS13 e diagnóstico de aTTP.

Neste contexto, surge uma oportunidade única para validar esta nova técnica, tanto retrospectivamente com os nossos dados já disponíveis de amostras congeladas como também no contexto de um grande estudo prospectivo. Este será o primeiro estudo a nível mundial a testar o método HemosIL AcuStar na prática clínica real numa população de PTT (populações espanhola e portuguesa de PTT) com o objetivo de padronizar a metodologia de diagnóstico e acompanhamento da doença.