Verbetering van immunologische en moleculaire technieken voor de diagnose en follow-up van patiënten met trombotische trombocytopenische purpura

Het ontbreken van ADAMTS13 is de enige biologische marker die specifiek is voor aTTP-diagnose8 en de beoordeling van ADAMTS13 is van klinisch belang omdat het essentieel is voor de snelle differentiële diagnose tussen aTTP en andere TMA. Bovendien is monitoring van ADAMTS13-activiteit nuttig om biologische remissie te verzekeren (ADAMTS13-niveaus > 10%) en om terugvallen te voorspellen.

Vanwege het hoge sterftecijfer van aTTP moet de behandeling worden gestart zodra de ziekte wordt vermoed, soms zelfs voordat bevestiging met de ADAMTS13-testresultaten. Deze situatie kan ertoe leiden dat sommige patiënten een verkeerde diagnose stellen, waardoor ze niet de juiste behandeling krijgen. Concluderend, ADAMTS13-activiteitstest is cruciaal voor een vroege diagnose en optimaal beheer van acute aTTP en elke vertraging in ADAMTS13-resultaten zal een negatieve invloed hebben op de diagnose, behandeling en prognose van de patiënt.

Er zijn momenteel 2 technieken beschikbaar voor de ADAMTS13-activiteitsbepaling, de fluorescentie-resonantie-energieoverdracht (FRET) en de Technozym chromogenic enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Beide worden beschouwd als referentiemethoden, maar ze vereisen aanzienlijke vaardigheid omdat ze in hoge mate handmatig zijn en dit verhoogt het risico op fouten. Bovendien zijn deze methoden tijdrovend, niet algemeen beschikbaar en, in het geval van de ELISA-methode, is bij elke run een nieuwe kalibratie vereist. De variabiliteit tussen laboratoria is ook een uitdaging en daarom kan een validatie- en/of interpretatiemethode nodig zijn.

Onlangs is een nieuwe en eerste volledig geautomatiseerde HemosIL AcuStar ADAMTS13 Activity assay (Instrumentation Laboratory, Bedford, Massachusetts, Verenigde Staten) ontwikkeld. HemosIL AcuStar ADAMTS13-activiteitsassay is een tweestaps chemiluminescente immunoassay (CLIA) met een analytische tijd van 33 minuten voor de kwantitatieve meting van ADAMTS13-activiteit in menselijk gecitreerd plasma op de ACL AcuStar-analysator. De immunoassay maakt gebruik van het GST-VWF73-substraat in combinatie met magnetische deeltjes voor snelle scheiding en detectie met chemiluminescentietechnologie. De in het plasmamonster aanwezige ADAMTS13 splitst het GST-VWF73-substraat en de detectie van de gegenereerde fragmenten is gebaseerd op een met isoluminol gemerkt monoklonaal antilichaam dat specifiek reageert met het gesplitste peptide. Het uitgezonden licht is evenredig met de ADAMTS13-activiteit in het monster.

Deze nieuwe ADAMTS13-assaymethode is in twee verschillende onderzoeken vergeleken met de andere twee beschikbare technieken. Ten eerste, Favresse et al. publiceerde de resultaten van de vergelijking tussen de Technozym-activiteit ELISA-assay en de nieuwe HemosIL AcuStar chemiluminescentie-assay. Aan de andere kant, Valsecchi et al. hebben onlangs de resultaten gepubliceerd van de validatie van deze nieuwe techniek in vergelijking met ELISA en FRETS in 176 monsters. Beide onderzoeken concluderen dat de nieuwe chemiluminescente ADAMTS13-activiteitstest een goede correlatie en uitstekende klinische prestaties liet zien voor de diagnose van ernstige ADAMTS13-deficiëntie met de FRETS-VWF73-test en een commerciële ELISA wanneer alleen ADAMTS13-activiteitswaarden van minder dan 10% worden overwogen (de internationaal aanvaarde grenswaarde). uitgeschakeld voor een diagnose van ernstige ADAMTS13-deficiëntie typisch voor aTTP). Stratmann et al. hebben zojuist een ander onderzoek gepubliceerd waarin de HemosIL AcuStar-chemiluminescentietest wordt vergeleken met twee in de handel verkrijgbare ADAMTS13-testkits met 24 gepaarde testmonsters afkomstig van 10 achtereenvolgens gerekruteerde patiënten13 en hun resultaten bevestigen de eerder gepubliceerde gegevens die suggereren dat de AcuStar-test een waardevol en nauwkeurig hulpmiddel zou kunnen zijn voor ADAMTS13-activiteitstest en aTTP-diagnose.

In deze context wordt een unieke kans gecreëerd om deze nieuwe techniek te valideren, zowel retrospectief met onze reeds beschikbare gegevens van bevroren monsters als ook in de context van een grote prospectieve studie. Dit zal de eerste studie zijn die wereldwijd de HemosIL AcuStar-methode test in de praktijk van een aTTP-populatie (Spaanse en Portugese aTTP-populaties) met als doel de diagnose en follow-upmethodologie voor de ziekte te standaardiseren.