Amélioration des techniques immunologiques et moléculaires pour le diagnostic et le suivi des patients atteints de purpura thrombotique thrombocytopénique

L'absence d'ADAMTS13 est le seul marqueur biologique spécifique du diagnostic d'aTTP8 et l'évaluation d'ADAMTS13 est d'une importance clinique car elle est essentielle pour le diagnostic différentiel rapide entre l'aTTP et les autres MAT. De plus, la surveillance de l'activité d'ADAMTS13 est utile pour assurer la rémission biologique (taux d'ADAMTS13 > 10 %) ainsi que pour prédire les rechutes.

En raison du taux de mortalité élevé du TTPa, le traitement doit être débuté dès que la maladie est suspectée, parfois même avant la confirmation par les résultats du test ADAMTS13. Cette situation peut conduire à mal diagnostiquer certains patients et les laisser sans traitement approprié. En conclusion, le test d'activité ADAMTS13 est crucial pour un diagnostic précoce et une prise en charge optimale du PTT aigu et tout retard dans les résultats ADAMTS13 aura un impact négatif sur le diagnostic, le traitement et le pronostic du patient.

Il existe actuellement 2 techniques disponibles pour la détermination de l'activité ADAMTS13, le transfert d'énergie par résonance de fluorescence (FRET) et le dosage immuno-enzymatique chromogénique Technozym (ELISA). Les deux sont considérées comme des méthodes de référence, mais elles nécessitent des compétences considérables car elles sont très manuelles, ce qui augmente le risque d'erreur. De plus, ces méthodes prennent du temps, ne sont pas largement disponibles et, dans le cas de la méthode ELISA, elles nécessitent un nouvel étalonnage à chaque passage. La variabilité inter-laboratoires est également un défi et, par conséquent, une méthode de validation et/ou d'interprétation pourrait être nécessaire.

Récemment, un nouveau et premier test d'activité HemosIL AcuStar ADAMTS13 entièrement automatisé (Laboratoire d'instrumentation, Bedford, Massachusetts, États-Unis) a été développé. Le test d'activité HemosIL AcuStar ADAMTS13 est un test immunologique chimiluminescent (CLIA) en deux étapes avec un temps d'analyse de 33 minutes pour la mesure quantitative de l'activité ADAMTS13 dans le plasma humain citraté sur l'analyseur ACL AcuStar. L'immunodosage utilise le substrat GST-VWF73 en combinaison avec des particules magnétiques pour une séparation rapide et une détection par la technologie de chimiluminescence. L'ADAMTS13 présent dans l'échantillon de plasma clive le substrat GST-VWF73 et la détection des fragments générés est basée sur un anticorps monoclonal marqué à l'isoluminol qui réagit spécifiquement avec le peptide clivé. La lumière émise est proportionnelle à l'activité ADAMTS13 dans l'échantillon.

Cette nouvelle méthode de dosage ADAMTS13 a été comparée aux deux autres techniques disponibles dans deux études différentes. Tout d'abord, Favresse et al. a publié les résultats de la comparaison entre le test ELISA d'activité Technozym et le nouveau test chimiluminescent HemosIL AcuStar. En revanche, Valsecchi et al. ont récemment publié les résultats de validation de cette nouvelle technique par rapport à ELISA et FRETS sur 176 échantillons. Les deux études concluent que le nouveau test d'activité ADAMTS13 chimiluminescent a montré une bonne corrélation et d'excellentes performances cliniques pour le diagnostic du déficit sévère en ADAMTS13 avec le test FRETS-VWF73 et un test ELISA commercial en considérant uniquement les valeurs d'activité ADAMTS13 inférieures à 10 % (la valeur seuil acceptée au niveau international). off pour un diagnostic de déficit sévère en ADAMTS13 typique d'un TTPa). Enfin, Stratmann et al. viennent de publier une autre étude comparant le test chimiluminescent HemosIL AcuStar avec deux kits de test ADAMTS13 disponibles dans le commerce utilisant 24 échantillons de test appariés provenant de 10 patients recrutés consécutivement13 et leurs résultats corroborent les données publiées précédemment suggérant que le test AcuStar pourrait être un outil précieux et précis pour Test d'activité ADAMTS13 et diagnostic aTTP.

Dans ce contexte, une opportunité unique de valider cette nouvelle technique est générée, à la fois rétrospectivement avec nos données déjà disponibles à partir d'échantillons congelés et également dans le cadre d'une vaste étude prospective. Il s'agira de la première étude mondiale testant la méthode HemosIL AcuStar dans la pratique clinique réelle de la population ATTP (populations ATTP espagnole et portugaise) dans le but de standardiser le diagnostic et la méthodologie de suivi de la maladie.