Zlepšení imunologických a molekulárních technik pro diagnostiku a sledování pacientů s trombotickou trombocytopenickou purpurou

Absence ADAMTS13 je jediným biologickým markerem, který je specifický pro diagnózu aTTP8 a posouzení ADAMTS13 má klinický význam, protože je nezbytné pro rychlou diferenciální diagnostiku mezi aTTP a jinými TMA. Kromě toho je monitorování aktivity ADAMTS13 užitečné k zajištění biologické remise (hladiny ADAMTS13 > 10 %) a také k predikci relapsů.

Vzhledem k vysoké úmrtnosti aTTP by měla být léčba zahájena ihned při podezření na onemocnění, někdy dokonce před potvrzením výsledků testu ADAMTS13. Tato situace může vést k nesprávné diagnóze některých pacientů a nechat je bez vhodné léčby. Závěrem lze říci, že test aktivity ADAMTS13 je zásadní pro včasnou diagnózu a optimální léčbu akutní aTTP a jakékoli zpoždění ve výsledcích ADAMTS13 bude mít negativní dopad na diagnózu, léčbu a prognózu pacienta.

V současné době jsou k dispozici 2 techniky pro stanovení aktivity ADAMTS13, přenos fluorescenční rezonanční energie (FRET) a Technozym chromogenic enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Obě jsou považovány za referenční metody, ale vyžadují značnou zručnost, protože jsou vysoce manuální, což zvyšuje riziko chyby. Kromě toho jsou tyto metody časově náročné, nejsou široce dostupné a v případě metody ELISA vyžaduje novou kalibraci při každém běhu. Výzvou je také mezilaboratorní variabilita, a proto může být zapotřebí metoda validace a/nebo interpretace.

Nedávno byl vyvinut nový a první plně automatizovaný test aktivity HemosIL AcuStar ADAMTS13 (Instrumentation Laboratory, Bedford, Massachusetts, Spojené státy americké). Test aktivity HemosIL AcuStar ADAMTS13 je dvoukrokový chemiluminiscenční imunotest (CLIA) s analytickým časem 33 minut pro kvantitativní měření aktivity ADAMTS13 v lidské plazmě s citrátem na analyzátoru ACL AcuStar. Imunoanalýza využívá substrát GST-VWF73 v kombinaci s magnetickými částicemi pro rychlou separaci a detekci technologií chemiluminiscence. ADAMTS13 přítomný ve vzorku plazmy štěpí substrát GST-VWF73 a detekce vytvořených fragmentů je založena na monoklonální protilátce značené isoluminolem, která specificky reaguje se štěpeným peptidem. Vyzařované světlo je úměrné aktivitě ADAMTS13 ve vzorku.

Tato nová testovací metoda ADAMTS13 byla porovnána s dalšími dvěma dostupnými technikami ve dvou různých studiích. Nejprve Favresse et al. publikovali výsledky srovnání mezi testem Technozym activity ELISA a novým chemiluminiscenčním testem HemosIL AcuStar. Na druhou stranu Valsecchi a spol. nedávno publikovali výsledky validace této nové techniky ve srovnání s ELISA a FRETS u 176 vzorků. Obě studie dospěly k závěru, že nový chemiluminiscenční test aktivity ADAMTS13 prokázal dobrou korelaci a vynikající klinický výkon pro diagnostiku těžkého deficitu ADAMTS13 s testem FRETS-VWF73 a komerčním testem ELISA, když se berou v úvahu pouze hodnoty aktivity ADAMTS13 pod 10 % (mezinárodně uznávaný cut- off pro diagnózu těžkého deficitu ADAMTS13 typického pro aTTP). Nakonec Stratmann a kol. právě publikovali další studii porovnávající chemiluminiscenční test HemosIL AcuStar se dvěma komerčně dostupnými testovacími soupravami ADAMTS13 s použitím 24 spárovaných testovacích vzorků odvozených od 10 po sobě jdoucích pacientů13 a jejich výsledky potvrzují dříve publikovaná data naznačující, že by AcuStar test mohl být cenným a přesným nástrojem pro Testování aktivity ADAMTS13 a diagnostika aTTP.

V této souvislosti se generuje jedinečná příležitost ověřit tuto novou techniku, a to jak retrospektivně s našimi již dostupnými daty ze zmrazených vzorků, tak také v kontextu velké prospektivní studie. Půjde o první celosvětovou studii testující metodu HemosIL AcuStar v reálné klinické praxi aTTP populaci (španělské a portugalské aTTP populace) s cílem standardizovat diagnostiku a metodiku sledování onemocnění.