Совершенствование иммунологических и молекулярных методов диагностики и динамического наблюдения за пациентами с тромботической тромбоцитопенической пурпурой

Отсутствие ADAMTS13 является единственным биологическим маркером, специфичным для диагностики аТТП8, и оценка ADAMTS13 имеет клиническое значение, поскольку она необходима для быстрой дифференциальной диагностики между аТТП и другими ТМА. Кроме того, мониторинг активности ADAMTS13 полезен для обеспечения биологической ремиссии (уровни ADAMTS13> 10%), а также для прогнозирования рецидивов.

Из-за высокой смертности от аТТП лечение следует начинать сразу же при подозрении на заболевание, иногда даже до подтверждения результатами теста ADAMTS13. Эта ситуация может привести к неправильной диагностике некоторых пациентов и оставить их без соответствующего лечения. В заключение, анализ активности ADAMTS13 имеет решающее значение для ранней диагностики и оптимального лечения острой аТТП, и любая задержка результатов ADAMTS13 окажет негативное влияние на диагностику, лечение и прогноз пациента.

В настоящее время доступны 2 метода определения активности ADAMTS13: резонансный перенос энергии флуоресценции (FRET) и хромогенный твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) Technozym. Оба считаются эталонными методами, но они требуют значительных навыков, поскольку выполняются вручную, что увеличивает риск ошибки. Кроме того, эти методы требуют много времени, малодоступны и, в случае метода ELISA, требуют новой калибровки при каждом запуске. Межлабораторная изменчивость также является проблемой, и поэтому может потребоваться метод проверки и/или интерпретации.

Недавно был разработан новый и первый полностью автоматизированный анализ активности HemosIL AcuStar ADAMTS13 (Instrumentation Laboratory, Бедфорд, Массачусетс, США). Анализ активности HemosIL AcuStar ADAMTS13 представляет собой двухэтапный хемилюминесцентный иммуноанализ (ХЛИА) с аналитическим временем 33 минуты для количественного измерения активности ADAMTS13 в цитратной плазме человека на анализаторе ACL AcuStar. В иммуноанализе используется субстрат GST-VWF73 в сочетании с магнитными частицами для быстрого разделения и обнаружения с помощью технологии хемилюминесценции. ADAMTS13, присутствующий в образце плазмы, расщепляет субстрат GST-VWF73, и обнаружение генерируемых фрагментов основано на моноклональном антителе, меченном изолюминолом, которое специфически реагирует с расщепленным пептидом. Излучаемый свет пропорционален активности ADAMTS13 в образце.

Этот новый метод анализа ADAMTS13 сравнивали с двумя другими доступными методами в двух разных исследованиях. Во-первых, Фавресс и соавт. опубликовали результаты сравнения активности Technozym ELISA и нового хемилюминесцентного анализа HemosIL AcuStar. С другой стороны, Valsecchi et al. недавно опубликовали результаты валидации этой новой методики в сравнении с ELISA и FRETS на 176 образцах. Оба исследования пришли к выводу, что новый хемилюминесцентный анализ активности ADAMTS13 показал хорошую корреляцию и отличные клинические характеристики для диагностики тяжелой недостаточности ADAMTS13 с анализом FRETS-VWF73 и коммерческим ИФА при рассмотрении только значений активности ADAMTS13 ниже 10% (международно выключен для диагноза тяжелого дефицита ADAMTS13, типичного для aTTP). Наконец, Stratmann et al. только что опубликовали другое исследование, сравнивающее хемилюминесцентный анализ HemosIL AcuStar с двумя коммерчески доступными наборами для анализа ADAMTS13 с использованием 24 парных тестовых образцов, полученных от 10 последовательно набранных пациентов13, и их результаты подтверждают ранее опубликованные данные, предполагающие, что анализ AcuStar может быть ценным и точным инструментом для Тестирование активности ADAMTS13 и диагностика aTTP.

В этом контексте создается уникальная возможность проверить этот новый метод как ретроспективно с нашими уже доступными данными из замороженных образцов, так и в контексте большого проспективного исследования. Это будет первое в мире исследование по тестированию метода HemosIL AcuStar в реальной клинической практике в популяции aTTP (испанская и португальская популяции aTTP) с целью стандартизации диагностики и методологии последующего наблюдения за заболеванием.