Mejora de las Técnicas Inmunológicas y Moleculares para el Diagnóstico y Seguimiento de Pacientes con Púrpura Trombocitopénica Trombótica

La falta de ADAMTS13 es el único marcador biológico específico para el diagnóstico de aTTP8 y la evaluación de ADAMTS13 tiene importancia clínica porque es fundamental para el diagnóstico diferencial rápido entre aTTP y otras MAT. Además, la monitorización de la actividad de ADAMTS13 es útil para asegurar la remisión biológica (niveles de ADAMTS13 > 10 %), así como para predecir recaídas.

Debido a la alta tasa de mortalidad de la aTTP, el tratamiento debe iniciarse tan pronto como se sospeche la enfermedad, a veces incluso antes de la confirmación con los resultados de la prueba ADAMTS13. Esta situación puede llevar a diagnosticar mal a algunos pacientes y dejarlos sin el tratamiento adecuado. En conclusión, el ensayo de actividad de ADAMTS13 es fundamental para un diagnóstico precoz y un tratamiento óptimo de la ATP aguda y cualquier retraso en los resultados de ADAMTS13 tendrá un impacto negativo en el diagnóstico, tratamiento y pronóstico del paciente.

Actualmente hay 2 técnicas disponibles para la determinación de la actividad de ADAMTS13, la transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) y el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas cromogénico (ELISA) de Technozym. Ambos se consideran métodos de referencia, pero requieren una habilidad considerable porque son muy manuales y esto aumenta el riesgo de error. Además, estos métodos consumen mucho tiempo, no están ampliamente disponibles y, en el caso del método ELISA, requiere una nueva calibración en cada ejecución. La variabilidad entre laboratorios también es un desafío y, por lo tanto, podría ser necesario un método de validación y/o interpretación.

Recientemente, se ha desarrollado un nuevo y primer ensayo de actividad HemosIL AcuStar ADAMTS13 completamente automatizado (Laboratorio de Instrumentación, Bedford, Massachusetts, Estados Unidos). El ensayo de actividad HemosIL AcuStar ADAMTS13 es un inmunoensayo quimioluminiscente (CLIA) de dos pasos con un tiempo analítico de 33 minutos para la medición cuantitativa de la actividad de ADAMTS13 en plasma humano con citrato en el analizador ACL AcuStar. El inmunoensayo utiliza el sustrato GST-VWF73 en combinación con partículas magnéticas para una rápida separación y detección mediante tecnología de quimioluminiscencia. El ADAMTS13 presente en la muestra de plasma escinde el sustrato GST-VWF73 y la detección de los fragmentos generados se basa en un anticuerpo monoclonal marcado con isoluminol que reacciona específicamente con el péptido escindido. La luz emitida es proporcional a la actividad de ADAMTS13 en la muestra.

Este nuevo método de ensayo ADAMTS13 se ha comparado con las otras dos técnicas disponibles en dos estudios diferentes. En primer lugar, Favresse et al. publicó los resultados de la comparación entre el ensayo ELISA de actividad Technozym y el nuevo ensayo quimioluminiscente HemosIL AcuStar. Por otro lado, Valsecchi et al. han publicado recientemente los resultados de validación de esta nueva técnica en comparación con ELISA y FRETS en 176 muestras. Ambos estudios concluyen que el nuevo ensayo de actividad ADAMTS13 quimioluminiscente mostró una buena correlación y un rendimiento clínico excelente para el diagnóstico de la deficiencia grave de ADAMTS13 con el ensayo FRETS-VWF73 y un ELISA comercial al considerar solo valores de actividad ADAMTS13 por debajo del 10 % (el valor de corte aceptado internacionalmente). apagado por un diagnóstico de deficiencia severa de ADAMTS13 típica de aTTP). Finalmente, Stratmann et al. acaban de publicar otro estudio que compara el ensayo quimioluminiscente HemosIL AcuStar con dos kits de ensayo ADAMTS13 disponibles en el mercado utilizando 24 muestras de prueba pareadas derivadas de 10 pacientes reclutados consecutivamente13 y sus resultados corroboran los datos publicados anteriormente que sugieren que el ensayo AcuStar podría ser una herramienta valiosa y precisa para Prueba de actividad ADAMTS13 y diagnóstico de aTTP.

En este contexto, se genera una oportunidad única para validar esta nueva técnica, tanto retrospectivamente con nuestros datos ya disponibles de muestras congeladas como en el contexto de un gran estudio prospectivo. Este será el primer estudio a nivel mundial que pruebe el método HemosIL AcuStar en la práctica clínica real con población aTTP (poblaciones aTTP españolas y portuguesas) con el objetivo de estandarizar la metodología de diagnóstico y seguimiento de la enfermedad.