Förbättring av immunologiska och molekylära tekniker för diagnos och uppföljning av patienter med trombotisk trombocytopen purpura

Avsaknaden av ADAMTS13 är den enda biologiska markören som är specifik för aTTP-diagnos8 och bedömningen av ADAMTS13 är av klinisk betydelse eftersom den är väsentlig för snabb differentialdiagnos mellan aTTP och annan TMA. Dessutom är övervakning av ADAMTS13-aktivitet användbar för att säkerställa biologisk remission (ADAMTS13-nivåer > 10%) samt förutsäga återfall.

På grund av den höga dödligheten av aTTP bör behandlingen påbörjas så snart sjukdomen misstänks, ibland till och med innan bekräftelse med ADAMTS13-testresultaten. Denna situation kan leda till feldiagnostisering av vissa patienter och lämna dem utan lämplig behandling. Sammanfattningsvis är ADAMTS13-aktivitetsanalysen avgörande för en tidig diagnos och optimal hantering av akut aTTP och varje försening av ADAMTS13-resultaten kommer att ha en negativ inverkan på patientens diagnos, behandling och prognos.

Det finns för närvarande 2 tekniker tillgängliga för ADAMTS13-aktivitetsbestämning, fluorescensresonansenergiöverföring (FRET) och Technozyms kromogena enzymkopplade immunosorbentanalys (ELISA). Båda betraktas som referensmetoder men de kräver stor skicklighet eftersom de är mycket manuella och detta ökar risken för fel. Dessutom är dessa metoder tidskrävande, inte allmänt tillgängliga och, i fallet med ELISA-metoden, kräver den en ny kalibrering vid varje körning. Variabiliteten mellan laboratorier är också en utmaning och därför kan en validerings- och/eller tolkningsmetod behövas.

Nyligen har en ny och första helautomatisk HemosIL AcuStar ADAMTS13 aktivitetsanalys (Instrumentation Laboratory, Bedford, Massachusetts, USA) utvecklats. HemosIL AcuStar ADAMTS13 aktivitetsanalys är en tvåstegs kemiluminescerande immunoanalys (CLIA) med en analystid på 33 minuter för kvantitativ mätning av ADAMTS13-aktivitet i human-citrerad plasma på ACL AcuStar-analysatorn. Immunanalysen använder GST-VWF73-substratet i kombination med magnetiska partiklar för snabb separation och kemiluminescensteknologisk upptäckt. ADAMTS13 som finns i plasmaprovet klyver GST-VWF73-substratet och detekteringen av de genererade fragmenten är baserad på en isoluminol-märkt monoklonal antikropp som specifikt reagerar med den kluvna peptiden. Det emitterade ljuset är proportionellt mot ADAMTS13-aktiviteten i provet.

Denna nya ADAMTS13 analysmetod har jämförts med de andra två tillgängliga teknikerna i två olika studier. Först, Favresse et al. publicerade resultaten av jämförelsen mellan Technozym-aktivitet ELISA-analysen och den nya HemosIL AcuStar kemiluminescerande analysen. Å andra sidan, Valsecchi et al. har nyligen publicerat resultaten av validering av denna nya teknik i jämförelse med ELISA och FRETS i 176 prover. Båda studierna drar slutsatsen att den nya kemiluminescenta ADAMTS13-aktivitetsanalysen visade en god korrelation och utmärkt klinisk prestanda för diagnos av allvarlig ADAMTS13-brist med FRETS-VWF73-analysen och en kommersiell ELISA när man endast beaktade ADAMTS13-aktivitetsvärden under 10 % (den internationellt accepterade snitt- av för en diagnos av allvarlig ADAMTS13-brist som är typisk för aTTP). Slutligen, Stratmann et al. har just publicerat en annan studie som jämför HemosIL AcuStar kemiluminescerande analys med två kommersiellt tillgängliga ADAMTS13-analyssatser med 24 parade testprover från 10 rekryterade patienter13 och deras resultat bekräftar tidigare publicerade data som tyder på att AcuStar-analysen kan vara ett värdefullt och korrekt verktyg för ADAMTS13 aktivitetstestning och aTTP-diagnostik.

I detta sammanhang genereras en unik möjlighet att validera denna nya teknik, både retrospektivt med våra redan tillgängliga data från frysta prover och även i samband med en stor prospektiv studie. Detta kommer att vara den första världsomspännande studien som testar HemosIL AcuStar-metoden i verklig klinisk praktik aTTP-populationer (spanska och portugisiska aTTP-populationer) med syftet att standardisera diagnos- och uppföljningsmetodik för sjukdomen.