Husk af en kohort af forsøgspersoner i Middelhavsområdet. Overvågning af leversygdomme (NutriHep 3). (Nutrihep3)

Leversygdomme repræsenterer et betydeligt folkesundhedsproblem med en høj forekomst og en voksende forekomst over hele verden og en betydelig indflydelse på global sygelighed og dødelighed, hvilket forårsager ca. 2 millioner dødsfald årligt. Dødsfald kan stort set tilskrives komplikationer af cirrhose og hepatocellulært karcinom. De mest almindelige årsager til cirrhose over hele verden er relateret til viral hepatitis, alkohol og ikke-alkoholisk fedtleversygdom forårsaget af dårlige kostvaner. Hepatotropiske vira er den etiologiske faktor i de fleste tilfælde af akut hepatitis, men lægemiddelinduceret leverskade repræsenterer i stigende grad en betydelig procentdel af tilfælde.

I Italien har forekomsten af ​​leversygdomme været genstand for studier i de senere år. Baseret på disse data er Italien blevet identificeret som en "hyper-endemisk" region, hvor både virale og metaboliske etiologier er ansvarlige for en høj forekomst og forekomst af kroniske leversygdomme. Endvidere er der observeret en progressiv stigning i forekomsten af ​​viral hepatitis fra det nordlige til det sydlige Italien. I de seneste årtier har etiologien af ​​disse sygdomme gennemgået en betydelig ændring.

Med hensyn til hepatitis B -virus (HBV) har vaccinationsprogrammet sammen med forbedrede socioøkonomiske tilstande og større befolkningsbevidsthed gradvist reduceret forekomsten og udbredelsen af ​​denne virussygdom. Kronisk hepatitis relateret til hepatitis C -virus (HCV), efter en stigning i 1980'erne og 1990'erne, viser nu en faldende tendens, især blandt yngre aldersgrupper. Mens andre undersøgelser har fokuseret på leversygdomme af metabolisk oprindelse (ASLD, METALD, ALD osv.), Som er indikeret som en af ​​de mest almindelige årsager til leversygdom verden over og i Italien, blev de seneste epidemiologiske data om den italienske befolkning samlet i slutningen af ​​1990'erne. Som et årti nu er gået, troede man, at det kunne være interessant at indsamle nye data om forekomstmønsteret for leversygdomme, især i det sydlige Italien, især i en kommune geografisk ligevægt fra både kysten og baglandet.

Derfor sigter denne observationsundersøgelse at analysere udviklingen af ​​leversygdomme ved at huske en kohort af patienter, der allerede er identificeret i Middelhavsområdet. Kohorten består af enkeltpersoner, der er bosiddende i den kommune i Putignano (BA), der allerede har gennemgået evaluering af leverfunktion, komorbiditeter og diætvaner, ud over at tilføje genetisk information gennem genom-bredt tilknytning (GWAS) -analyse, nyttigt til at identificere tilknytning mellem genetiske varianter og specifik phenotypisk karakteristik med det formål at opdage genetisk korrelieret Leversygdomme og relaterede komorbiditeter ved hjælp af en repræsentativ befolkningsprøve.

Analysen af ​​de indsamlede data sigter mod at identificere risikofaktorer og forudsigelige biomarkører for levering af leversygdom med det mål at optimere forebyggelses- og styringsstrategier. Resultaterne vil give nyttige oplysninger til at forbedre klinisk overvågning og fremme personaliserede interventioner hos personer med leversygdomme. Analyserne udføres ved hjælp af avanceret bioinformatik og statistiske metoder for at sikre resultaterne af resultaterne.

Denne tilbagekaldelse udføres næsten 20 år efter den første. Tilbagekaldelsen af ​​forsøgspersoner giver mulighed for en langsgående vurdering af sygdomsprogressionsfaktorer eller begyndelsen af ​​sygdommen.

Formålet med denne kohortundersøgelse er ikke kun at huske personer, der tidligere var involveret i NutriHep 1- og NutriHep2 -undersøgelser, men som alle kohortundersøgelser at evaluere sammenhængen mellem en eksponering og et resultat i en gruppe af individer. Ud over at revurdere de parametre, der tidligere blev overvejet (blodprøver, diætspørgeskema og fysisk aktivitet) for at undersøge deres variation, vil der udføres helgenomgenotype ved hjælp af helgenome-genotype af enkelt nukleotidspolymorfismer (SNP'er) ved anvendelse af High-Threughput Genomic Technologies, såsom SNP-array-teknologi. Denne teknologi muliggør analyse af tusinder/millioner af genetiske varianter, der er jævnt fordelt over hele genomet, tidligere karakteriseret i forskellige forfædrespopulationer og til stede i 1000 Genomes Project fase 3 -databasen.

Karakteriseringen af ​​disse genetiske varianter (SNP'er) giver os mulighed for at beregne for hvert individ i vores undersøgelseskohort, genetiske og polygene risikoresultater bestemt af den kombinerede indflydelse af flere genetiske varianter.

Specifikt udføres bestemmelsen af ​​genetiske og polygene risikoresultater ved hjælp af data opnået fra genom-dækkende associeringsundersøgelser (GWA'er) og ved hjælp af sofistikerede biostatistiske og matematiske algoritmer til at vægte allelen tæller på de varianter, der er forbundet med MAFLD-patologi baseret på den forfædres oprindelse af vores patientkohort. I efterfølgende faser vil de genetiske og polygene risikoresultater blive brugt til at undersøge foreningerne med de kliniske egenskaber for de syge forsøgspersoner for at identificere undergrupper af patienter med karakteristiske kliniske egenskaber og forudsige risikoen for indtræden og udviklingen af ​​patologien.

Nutrihep-kohorten (Putignano) blev først etableret i 2006-2007, der omfattede en kohort på 2300 emner, husket fra listerne over praktiserende læger i kommunen Putignano (BA) med et 1: 3-trin.

I 2015-2018 blev de samme emner tilbagekaldt med en opfølgningsadhæsion på 65,60%. Desuden blev 102 dødsfald registreret fra 2007 til 2014.

Tilbagekaldelsen vil overveje de 2300 fra den første bølge, hvorfra de dødsfald, der blev evalueret gennem konsultationen af ​​dødsregistrerne via det regionale Edotto -system, og dem, der flyttede til andre regioner, vil blive subtraheret.

Endvidere oprettes en indlejret kohort for at bevare undersøgelsespopulationen, der er uddraget med et 1: 3 -trin baseret på registreringerne af praktiserende læger. Denne tilgang er nyttig, fordi den oprindelige kohort har ældet og derfor ikke længere inkluderer personer, der tilhører de yngre aldersgrupper, som var til stede i begyndelsen af ​​undersøgelsen, men har ældet over tid. Dette gør det muligt for os at opretholde aldersfordelingen, der ligner den indledende, hvilket forhindrer, at kohorten bliver gradvist skæv mod ældre aldersgrupper, samt reducerer bias på grund af aldring af selve kohorten og forbedrer generaliserbarheden af ​​resultaterne. Det giver os også mulighed for at bevare den statistiske magt i undersøgelsen, fordi især nogle ældre aldersgrupper er kritiske for analysen af ​​virkningerne af eksponering på resultatet.

Med lignende modaliteter som de foregående vil denne observationsundersøgelse hovedsageligt fokusere på følgende faser:

Indledende fase

• Oprettelse af en liste over emner, der skal kaldes, og tegner fra både navnene på deltagerne i NutnRiHep 1 -undersøgelsen og beboerne i kommunen i Putignano gennem listen over praktiserende læger for at kompensere for den yngre aldersgruppe;
• Genkontakt om de emner, der stadig er i live, gennem breve sendt til deres hjem og opkald;
• Planlægning af aftaler.

V1:

• Underskrift af informeret samtykke;
• Evaluering af leveresundhed gennem ikke-invasiv undersøgelse med Fibroscan;
• Anamnesis baseret på epidemiologiske parametre (alder, køn, indkomst, patologisk og familiehistorie med leverrelaterede sygdomme);
• Indsamling af antropometriske parametre såsom vægt, højde, taljeomkrets, hofteomkrets, nakkeomkrets, håndledsomkrets og kalvomkreds. Endvidere registreres blodtryksparametre (systolisk og diastolisk) og fysisk fitnessstatus gennem følgende feltforsøg: håndgreb, sidde og nå test, enkeltbenstativ, 30 '' sidde til stå, ruffier test, VO2 max.

Tilmeldte forsøgspersoner får et accelerometer, der giver objektive og pålidelige oplysninger om fysisk aktivitet (accelerationer, bevægelser ...) og søvnkvalitet. Det vil blive givet på rekrutteringsdagen og returneret efter 7 dage.

For bedre at forstå, inden projektets start, aspekter, der kan forstyrre succesen med de foreslåede interventioner, udfylder emner et ekstra spørgeskema:

Endvidere afsluttes tests for at evaluere søvnkvalitet og kinesofobi, Pittsburgh Sleep Quality Index (PSQI) og Tampa -skalaen for kinesiophobia (TSK). Til klassificering af sarkopeni administreres den korte fysiske ydelsesbatteri (SPPB) -test; - Blodprøvetagning til rutinemæssige analyser. Følgende måles på prøverne: komplet blodtælling, CRP, total proteiner, ceruloplasmin, alfa 1 antitrypsin, glukose, hæmoglobin A1c (HBA1c), urinstof, kreatinin, estimeret glomerulær filtreringshastighed (EGFR), total og direkte bilirubin, albumin, aspartate aminotransferase (som AsT) Aminotransferase (ALT/GPT), gamma-glutamyltransferase (GGT), natrium, kalium, calcium, fosfor, jern, kolesterol, lipoprotein (HDL) med lav densitet, cortisol, cortisol, c-putepide, Vitamin D, insulin, ferritin, FOLATE, FOLATE, FOLATE, FOLATIK, Vitamin B12, parathyreoideahormon, skjoldbruskkirtelstimulerende hormon (TSH), fri triiodothyronin (FT3), fri thyroxin (FT4), insulinlignende vækstfaktor 1 (IGF-1), højfølsomhed C-reaktivt protein (HSCRP), pro-B-Type natriuretisk peptiditet (probective protein (HSCRP), Pro-B-B-Type Natriuretic peptidep) Zink, magnesium, HBV og HCV; Serum -alikvoter, muligvis tilbage efter de rutinemæssige blodkemiske analyser, vil blive gemt i Biobank til efterfølgende analyser og muligvis med emnets samtykke, der bruges til andre undersøgelser, som IRCCS "Saverio de Bellis" vil aktivere.

Genotypeanalyser vil blive udført på helblod -alikvoter, der også muligvis forbliver efter rutinemæssige analyser. Anonymitet garanteres ved at tildele en unik kode til patienten på tilmeldingstidspunktet.

-Levering af spørgeskemaer med selvtilskud: Fødevarespørgeskema (EPIC), fysisk aktivitet (IPAQ, lang form) og spørgeskemaer til vurdering af psykologisk sundhed: PSS-10 (opfattet stressskala), H.A.D.S. (Hospital Angst and Depression Scale), TMI-I (Test din hukommelse).

V2 (7 dage senere):

• Samling af blodkemiske tests;
• Levering af afføring og urinprøver. Fækalt calprotectin og okkult blod måles på afføringsprøverne; Afførings- og urinprøver opbevares derefter i Biobank. Afføringsprøver vil blive brugt til evaluering af tarmmikrobiota og fækalt metabolom. Urinprøver vil blive anvendt til metabolomics -målinger; Til evaluering af tarmmikrobiota ekstraheres total bakteriel metagenomisk DNA fra afføringsprøver ved anvendelse af Qiaamp Fast DNA -afføring mini -kit (Qiagen, Hilden, Tyskland). Mikrobiomkarakterisering udføres ved hjælp af en DNA -metabarkodning og haglgevær Metatranscriptomics -tilgang. DNA-metabarkodningsanalyse vil blive udført under anvendelse af V5-V6-hypervariable regioner på 16S rRNA for bakterier (Miseq-Illumina-platform). Prøver, der er signifikante i DNA -metabarkodningsanalysen, vil blive udsat for MetaTranscriptomics -analyse (NextSeq 500 - Illumina -platform). Metagenomics og MetaTranscriptomics -data analyseres ved hjælp af bioinformatikrørledninger.

For at udføre metabolomics-tests analyseres prøver for flygtige organiske forbindelser (VOC'er), som vil være termisk desorberet ved straks at overføre fiberen til den opvarmede injektionsport (220 ° C) af en Clarus 680 (Perkin Elmer, beaconsfield UK) udstyret med en RTX-WAX-søjle (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 µm (Restek) og koblet til en Clarus SQ8MS (Perkin Elmer) med kilde- og overførselslinjetemperaturer opretholdt ved henholdsvis 250 og 210 ° C.

• Samling af accelerometeret;
• Levering af spørgeskemaer og diskussion af dem for at undgå misforståelser og manglende data.