„Don't Eat me“-Signal bei hämatologischen Malignomen: CD24 als neues Ziel zur Verbesserung der Immunität gegen Krebs.

MCL ist ein aggressives B-NHL mit düsterer Prognose und hoher Rückfallwahrscheinlichkeit nach konventioneller Immunchemotherapie. CLL ist stattdessen eine unheilbare chronische B-Zell-Malignität mit einer höheren Rückfallwahrscheinlichkeit nach mehreren konventionellen Therapielinien und einem nicht zu vernachlässigenden Risiko der Progression zu einem aggressiven Lymphom. Weitere Ansätze sind erforderlich, um gültige Alternativen für diese rezidivierenden und refraktären Erkrankungen bereitzustellen. In diesen beiden Situationen ist TME bekanntermaßen am Überleben von Krebszellen beteiligt und hat einen negativen Einfluss auf die Wirksamkeit der Standardbehandlung und die adoptive T-Zell-Immunität, wofür bei schlechten Prognosebedingungen neue Immuntherapeutika ein alternativer Ansatz sein könnten. Innerhalb von TME sind TAM an der Verbesserung des Überlebens des Tumorwachstums bei MCL und CLL beteiligt und dämpfen auch die Immuntherapie. Es stellte sich heraus, dass Anti-CD47-mAb ein konsistentes DEM ist, das, sobald es blockiert ist, in der Lage ist, die Phagozytose und Clearance von Tumorzellen bei Blutkrebs zu verbessern. CD24 wurde kürzlich als weiteres DEM in der präklinischen Analyse bei solidem Krebs validiert. Da CD24 in der frühen Phase der B-Zell-Differenzierung exprimiert wird, könnten MCL und CLL die Blockade dieses Signals ausnutzen, da TAM und NCL eng mit ihren entsprechenden Tumorzellen verbunden sind und so für die Tumorzellproliferation und Immunflucht sorgen.

Um die Zwecke dieses Projekts zu erfüllen, wird die Sammlung übrig gebliebener Patientenproben routinemäßig zum Zeitpunkt der Diagnose und zum Zeitpunkt des Rückfalls der Krankheit durchgeführt, im letzteren Fall mit dem Ziel, alle CD24-, CD47- und CD20-Oberflächen zu überprüfen Expressionsmodifikation auf B-Zell-Blasten (z. B. Klonselektion mit CD24/CD47-Hochregulierung nach konventioneller Therapie), SIRP-α- und Siglec-10-Expression auf patienteneigenen Monozyten/Makrophagen-Systemen (exprimiert höhere Mengen an DEMs-Liganden als potenziellen Resistenzmechanismus). nach konventioneller Therapie).

Darüber hinaus werden Phagozytosetests mit Proben, die zum Zeitpunkt des Rückfalls entnommen wurden, mit den entsprechenden Experimenten verglichen, die mit den zum Zeitpunkt der Diagnose entnommenen Proben durchgeführt wurden, um mögliche Unterschiede zu bewerten.

Wie bereits beschrieben, basiert die Phagozytoseanalyse auf einem Kokulturprozess, bei dem der Anti-CD24-Antikörper (allein oder in Kombination mit anderen im sekundären Endpunkt beschriebenen Antikörpern) mit Makrophagen (von einem gesunden Spender oder vom Patienten) inkubiert wird. und Patiententumorzellen (MCL oder CLL), wobei letztere mit einer fluoreszierenden Substanz (d. h. CFSE) markiert sind. Es werden eine Makrophagenfärbung (mit Anti-CD11b-PE-Antikörper) und eine anschließende durchflusszytometrische Analyse durchgeführt: Das Verhältnis zwischen doppelt gefärbten Makrophagen (CD11b-PE+/CFSE+) und einfach gefärbten Makrophagen (CD11b-PE+) ergibt die Einheit der Phagozytose, die wird mit der Negativkontrolle und den anderen Versuchsbedingungen (Antikörperkombinationen, die später in den sekundären Endpunkten beschrieben werden) verglichen. Die Doppelfärbung von Makrophagen liefert indirekte Ergebnisse der Phagozytose (wenn der Makrophage CFSE+-Zellen phagozyten, erhält er zusätzlich zu der Färbung aufgrund des Anti-CD11b-PE-Antikörpers auch diese Färbung).

Schließlich werden von Spendern stammende Makrophagen aus PBMC isoliert, das aus übrig gebliebenem peripherem Blut gewonnen wird, das im Kreislauf verbleibt, der für die Thrombozytenpherese gesunder Spender verwendet wird. Tatsächlich befinden sich im Reservoir dieses Kreislaufs Restblutmengen (fast 15 ml), die nach dem Eingriff normalerweise entsorgt werden. Spender unterzeichnen eine Einverständniserklärung zur Verwendung des übrig gebliebenen Materials für Forschungszwecke und insbesondere für dieses Projekt.