Sinal "Não me coma" em neoplasias hematológicas: CD24 como novo alvo para melhorar a imunidade anti-câncer.

MCL é um B-NHL agressivo com prognóstico sombrio com alta probabilidade de recidiva após regime imunoquimioterápico convencional. Em vez disso, a LLC é uma malignidade crônica incurável de células B com maior probabilidade de recidiva após várias linhas de terapias convencionais e um risco não negligenciável de progressão para um linfoma agressivo. Mais abordagens são necessárias para fornecer alternativas válidas para essas doenças recidivantes e refratárias. Nesses dois ambientes, sabe-se que o TME está envolvido na sobrevivência das células cancerígenas e confere um impacto negativo na eficácia do tratamento padrão e na imunidade adotiva das células T, para as quais novos agentes imunoterapêuticos podem ser uma abordagem alternativa em caso de cenários de prognóstico ruim. Dentro do TME, o TAM está envolvido na melhoria da sobrevida do crescimento tumoral em MCL e CLL, amortecendo também a imunoterapia. O mAb anti-CD47 revelou-se um DEM consistente que, uma vez bloqueado, é capaz de melhorar a fagocitose e a depuração de células tumorais no câncer de sangue. O CD24 foi recentemente validado como outro DEM na análise pré-clínica em câncer sólido. Como o CD24 é expresso durante a fase inicial da diferenciação de células B, MCL e CLL podem aproveitar o bloqueio desse sinal, uma vez que TAM e NCLs estão estritamente interconectados com suas células tumorais correspondentes, proporcionando proliferação de células tumorais e escape imunológico.

Para cumprir os objetivos deste projeto, a coleta de amostras de sobras de pacientes será realizada rotineiramente no momento do diagnóstico e no momento da recidiva da doença, neste último caso com o objetivo de verificar qualquer superfície de CD24, CD47 e CD20 modificação da expressão em blastos de células B (por exemplo, seleção de clone com regulação positiva de CD24/CD47 após regime convencional), expressão de SIRP-α e Siglec-10 no sistema Monócito/Macrófago derivado do paciente (expressando níveis mais altos de ligantes DEMs como mecanismo potencial de resistência após a terapia convencional).

Além disso, ensaios de fagocitose com amostras obtidas no momento da recidiva serão comparados com experimentos equivalentes realizados com as amostras coletadas no momento do diagnóstico para avaliar possíveis diferenças.

Conforme descrito anteriormente, a análise de fagocitose será baseada em um processo de co-cultura que envolve o uso do anticorpo anti-CD24 (sozinho ou em combinação com outros anticorpos descritos no endpoint secundário) incubando com macrófagos (de doador saudável ou de paciente) e células tumorais de pacientes (MCL ou CLL), estas últimas marcadas com uma substância fluorescente (i.e., CFSE). A coloração de macrófagos (com anticorpo anti-CD11b-PE) e subsequente análise de citometria de fluxo será realizada: a razão entre macrófagos com dupla coloração (CD11b-PE+/CFSE+) e macrófagos com coloração simples (CD11b-PE+) fornecerá a entidade de fagocitose, que serão comparados com o controle negativo e as outras condições experimentais (combinações de anticorpos descritas posteriormente nos pontos finais secundários). A dupla coloração de macrófagos fornece resultados indiretos de fagocitose (se o macrófago fagocitar células CFSE+, ele também adquirirá esta coloração além daquela devida ao anticorpo anti-CD11b-PE).

Por fim, macrófagos derivados de doadores serão isolados de PBMC obtidas de sobras de sangue periférico que permaneceram no circuito utilizado para plaquetaférese de doadores saudáveis. Aliás, sangue residual (quase 15 ml) pode ser encontrado no reservatório desse circuito que normalmente é descartado após o procedimento. Os doadores assinarão um consentimento informado para o uso do material restante para fins de pesquisa e este projeto em particular.