Sygnał „Nie jedz mnie” w nowotworach hematologicznych: CD24 jako nowy cel poprawy odporności przeciwnowotworowej.

MCL jest agresywnym B-NHL o złym rokowaniu z dużym prawdopodobieństwem nawrotu po konwencjonalnym schemacie immunochemioterapii. CLL jest zamiast tego nieuleczalnym przewlekłym nowotworem złośliwym komórek B z większym prawdopodobieństwem nawrotu po kilku liniach konwencjonalnych terapii i nie bez znaczenia ryzykiem progresji do agresywnego chłoniaka. Potrzebne są dalsze podejścia, aby zapewnić ważne alternatywy dla tych nawracających i opornych na leczenie chorób. Wiadomo, że w tych dwóch ustawieniach TME bierze udział w przeżywalności komórek nowotworowych i ma negatywny wpływ na standardową skuteczność leczenia i odporność adopcyjną komórek T, dla których nowe środki immunoterapeutyczne mogłyby stanowić alternatywne podejście w przypadku złych warunków prognostycznych. W ramach TME TAM są zaangażowane w poprawę przeżywalności wzrostu guza w MCL i CLL, a także tłumienie immunoterapii. Okazało się, że mAb anty-CD47 jest spójnym DEM, które po zablokowaniu jest w stanie poprawić fagocytozę i klirens komórek nowotworowych w raku krwi. CD24 został niedawno zwalidowany jako kolejny DEM w analizie przedklinicznej w raku litym. Ponieważ CD24 ulega ekspresji podczas wczesnej fazy różnicowania komórek B, MCL i CLL mogą wykorzystać blokadę tego sygnału, ponieważ TAM i NCL są ściśle połączone z odpowiadającymi im komórkami nowotworowymi, zapewniając proliferację komórek nowotworowych i ucieczkę immunologiczną.

Aby zrealizować cele tego projektu rutynowo pobierane będą resztki próbek pobranych od pacjentów w momencie postawienia diagnozy oraz w momencie nawrotu choroby, w tym drugim przypadku w celu sprawdzenia powierzchni CD24, CD47 i CD20 modyfikacja ekspresji na blastach komórek B (np. selekcja klonów z regulacją w górę CD24/CD47 po konwencjonalnym schemacie), ekspresja SIRP-α i Siglec-10 na pochodzącym od pacjenta systemie Monocyte/Macrophage (ekspresja wyższych poziomów ligandów DEM jako potencjalnego mechanizmu oporności po konwencjonalnej terapii).

Ponadto testy fagocytozy z próbkami pobranymi w czasie nawrotu zostaną porównane z równoważnymi eksperymentami przeprowadzonymi z próbkami pobranymi w czasie diagnozy, aby ocenić potencjalne różnice.

Jak opisano wcześniej, analiza fagocytozy będzie oparta na procesie wspólnej hodowli, który obejmuje użycie przeciwciała anty-CD24 (samo lub w połączeniu z innymi przeciwciałami opisanymi w drugorzędowym punkcie końcowym) inkubowanych z makrofagami (od zdrowego dawcy lub od pacjenta) oraz komórki nowotworowe pacjenta (MCL lub CLL), te ostatnie znakowane substancją fluorescencyjną (tj. CFSE). Zostanie przeprowadzone barwienie makrofagów (przeciwciałem anty-CD11b-PE) i późniejsza analiza metodą cytometrii przepływowej: stosunek makrofagów wybarwionych podwójnie (CD11b-PE+/CFSE+) do makrofagów wybarwionych pojedynczo (CD11b-PE+) dostarczy jednostki fagocytozy, która zostaną porównane z kontrolą ujemną i innymi warunkami doświadczalnymi (kombinacje przeciwciał opisane później w drugorzędowych punktach końcowych). Podwójne barwienie makrofagów dostarcza pośrednich wyników fagocytozy (jeśli makrofag fagocytuje komórki CFSE+, uzyska również to barwienie oprócz barwienia z powodu przeciwciała anty-CD11b-PE).

Na koniec makrofagi pochodzące od dawców zostaną wyizolowane z PBMC uzyskanych z resztek krwi obwodowej, która pozostała w obwodzie używanym do ferezy płytek zdrowych dawców. W rzeczywistości w zbiorniczku tego obwodu, który normalnie jest wyrzucany po zabiegu, można znaleźć zalegającą krew (prawie 15 ml). Darczyńcy podpiszą świadomą zgodę na wykorzystanie pozostałego materiału do celów badawczych, aw szczególności do niniejszego projektu.