Señal de "No me comas" en neoplasias malignas hematológicas: CD24 como nuevo objetivo para mejorar la inmunidad contra el cáncer.

El MCL es un B-NHL agresivo con un pronóstico sombrío con alta probabilidad de recaída después del régimen inmunoquimioterapéutico convencional. La CLL es, en cambio, una neoplasia crónica incurable de células B con mayor probabilidad de recaída después de varias líneas de terapias convencionales y un riesgo no despreciable de progresión a un linfoma agresivo. Se necesitan enfoques adicionales para proporcionar alternativas válidas para estas enfermedades recidivantes y refractarias. En estos dos entornos, se sabe que la TME está involucrada en la supervivencia de las células cancerosas y confiere un impacto negativo en la eficacia del tratamiento estándar y la inmunidad adoptiva de las células T, para lo cual los nuevos agentes inmunoterapéuticos podrían ser un enfoque alternativo en caso de entornos de mal pronóstico. Dentro de TME, TAM está involucrado en mejorar la supervivencia del crecimiento tumoral en MCL y CLL, amortiguando también la inmunoterapia. El mAb anti-CD47 resultó ser un DEM consistente que, una vez bloqueado, puede mejorar la fagocitosis y la eliminación de células tumorales en el cáncer de sangre. CD24 se ha validado recientemente como otro DEM en análisis preclínicos en cáncer sólido. Dado que CD24 se expresa durante la fase temprana de la diferenciación de células B, MCL y CLL podrían aprovechar el bloqueo de esta señal, ya que TAM y NCL están estrictamente interconectados con sus células tumorales correspondientes, lo que proporciona proliferación de células tumorales y escape inmunitario.

Para cumplir con los propósitos de este proyecto, la recolección de muestras derivadas de pacientes sobrantes se realizará de manera rutinaria en el momento del diagnóstico y en el momento de la recaída de la enfermedad, en este último caso con el objetivo de verificar cualquier superficie CD24, CD47 y CD20. modificación de la expresión en blastos de células B (p. ej., selección de clones con aumento de CD24/CD47 después de un régimen convencional), expresión de SIRP-α y Siglec-10 en el sistema monocito/macrófago derivado del paciente (que expresa niveles más altos de ligandos DEM como mecanismo potencial de resistencia después de la terapia convencional).

Además, los ensayos de fagocitosis con muestras obtenidas en el momento de la recaída se compararán con los experimentos equivalentes realizados con las muestras recogidas en el momento del diagnóstico para evaluar posibles diferencias.

Como se describió anteriormente, el análisis de fagocitosis se basará en un proceso de cocultivo que implica el uso del anticuerpo anti-CD24 (solo o en combinación con otros anticuerpos descritos en el criterio de valoración secundario) incubando con macrófagos (de un donante sano o del paciente) y células tumorales del paciente (MCL o CLL), esta última marcada con una sustancia fluorescente (es decir, CFSE). Se realizará la tinción de macrófagos (con anticuerpo anti-CD11b-PE) y el posterior análisis de citometría de flujo: la proporción entre macrófagos con doble tinción (CD11b-PE+/CFSE+) y macrófagos con una sola tinción (CD11b-PE+) proporcionará la entidad de fagocitosis, que se comparará con el control negativo y las demás condiciones experimentales (combinaciones de anticuerpos descritas más adelante en los criterios de valoración secundarios). La doble tinción de macrófagos proporciona resultados indirectos de fagocitosis (si el macrófago fagocita células CFSE+, también adquirirá esta tinción además de la debida al anticuerpo anti-CD11b-PE).

Finalmente, los macrófagos derivados del donante se aislarán de las PBMC obtenidas de la sangre periférica sobrante que quedó dentro del circuito utilizado para la plaquetaféresis de donantes sanos. De hecho, se puede encontrar sangre residual (casi 15 ml) en el reservorio de este circuito que normalmente se desecha después del procedimiento. Los donantes firmarán un consentimiento informado para el uso del material sobrante con fines de investigación y este proyecto en particular.