Segnale "Non mangiarmi" nei tumori ematologici: CD24 come nuovo bersaglio per migliorare l'immunità anticancro.

MCL è un B-NHL aggressivo con prognosi infausta con alta probabilità di recidiva dopo regime immunochemioterapico convenzionale. La CLL è invece un tumore maligno cronico a cellule B incurabile con maggiore probabilità di recidiva dopo diverse linee di terapie convenzionali e un rischio non trascurabile di progressione in un linfoma aggressivo. Sono necessari ulteriori approcci per fornire alternative valide per queste malattie recidivanti e refrattarie. In questi due contesti, è noto che la TME è coinvolta nella sopravvivenza delle cellule tumorali e conferisce un impatto negativo sull'efficacia del trattamento standard e sull'immunità adottiva delle cellule T, per le quali i nuovi agenti immunoterapeutici potrebbero essere un approccio alternativo in caso di impostazioni prognostiche sfavorevoli. All'interno di TME, TAM è coinvolto nel miglioramento della sopravvivenza della crescita tumorale in MCL e CLL, smorzando anche l'immunoterapia. Anti-CD47 mAb si è rivelato un consistente DEM che, una volta bloccato, è in grado di migliorare la fagocitosi e la clearance delle cellule tumorali nei tumori del sangue. CD24 è stato recentemente convalidato come un altro DEM nell'analisi preclinica nel cancro solido. Poiché il CD24 è espresso durante la fase iniziale della differenziazione delle cellule B, MCL e CLL potrebbero trarre vantaggio dal blocco di questo segnale, poiché TAM e NCL sono strettamente interconnessi con le loro corrispondenti cellule tumorali, fornendo proliferazione delle cellule tumorali e fuga immunitaria.

Per soddisfare gli scopi di questo progetto, la raccolta dei campioni rimanenti derivati ​​dal paziente sarà eseguita di routine al momento della diagnosi e al momento della ricaduta della malattia, in quest'ultimo caso con l'obiettivo di controllare l'eventuale superficie di CD24, CD47 e CD20 modifica dell'espressione su blasti di cellule B (ad esempio, selezione di cloni con sovraregolazione di CD24/CD47 dopo regime convenzionale), espressione di SIRP-α e Siglec-10 su sistema di monociti/macrofagi derivati ​​dal paziente (che esprimono livelli più elevati di ligandi DEM come potenziale meccanismo di resistenza dopo terapia convenzionale).

Inoltre, i saggi di fagocitosi con campioni ottenuti al momento della recidiva saranno confrontati con gli esperimenti equivalenti eseguiti con i campioni raccolti al momento della diagnosi per valutare eventuali differenze.

Come precedentemente descritto, l'analisi della fagocitosi si baserà su un processo di co-coltura che prevede l'uso dell'anticorpo anti-CD24 (da solo o in combinazione con altri anticorpi descritti nell'endpoint secondario) in incubazione con macrofagi (da donatore sano o da paziente) e cellule tumorali del paziente (MCL o CLL), quest'ultima marcata con una sostanza fluorescente (es. CFSE). Verrà eseguita la colorazione dei macrofagi (con anticorpo anti-CD11b-PE) e successiva analisi citofluorimetrica: il rapporto tra macrofagi a doppia colorazione (CD11b-PE+/CFSE+) e macrofagi a singola colorazione (CD11b-PE+) fornirà l'entità della fagocitosi, che saranno confrontati con il controllo negativo e le altre condizioni sperimentali (combinazioni di anticorpi descritte più avanti negli endpoint secondari). La doppia colorazione dei macrofagi fornisce risultati indiretti di fagocitosi (se il macrofago fagocita cellule CFSE+, acquisirà anche questa colorazione in aggiunta a quella dovuta all'anticorpo anti-CD11b-PE).

Infine, i macrofagi derivati ​​da donatore saranno isolati da PBMC ottenuti da sangue periferico rimanente che è rimasto all'interno del circuito utilizzato per la piastrinoaferesi di donatori sani. Nel serbatoio di questo circuito, infatti, si trova del sangue residuo (quasi 15 ml) che normalmente viene cestinato dopo l'intervento. I donatori firmeranno il consenso informato per l'utilizzo del materiale rimanente per scopi di ricerca e questo progetto in particolare.