Klonaler Status des Nebenschilddrüsentumors

Um die Häufigkeit von monoklonalen X- und polyklonalen X-Tumoren bei Teilnehmern mit primärem Hyperparathyreoidismus (PHPT) zu definieren, die sich einer Parathyreoidektomie (PTX) unterziehen, und um die Beziehung zwischen dem klonalen Status des Nebenschilddrüsentumors und der Neoplasie mehrerer Drüsen (MGN) zu definieren, werden die Forscher chirurgische und pathologische vergleichen Ergebnisse zum Tumorklonalstatus in einer multizentrischen Kohorte von Teilnehmern mit bilateraler Halsexploration (BNE) und PTX.

Die Studienteilnehmer werden aus vier hochvolumigen Zentren an der Washington University in St. Louis (WU), der University of California San Francisco, der University of Alabama-Birmingham und der University of Pennsylvania rekrutiert. Berechtigte Teilnehmer erhalten eine Standardbehandlung (Parathyreoidektomie) und nicht identifizierte, formalinfixierte, in Paraffin eingebettete (FFPE) Tumorproben (gefärbt und ungefärbt von jeder abnormalen Drüse) werden zur Untersuchung an die WU geschickt. DNA wird aus FFPE-Proben extrahiert und der HUMARA-Assay wird gemäß unserem etablierten Protokoll durchgeführt. Unsere beiden veröffentlichten Studien zeigen eine Übereinstimmung von >90 % zwischen wiederholten HUMARA-Tests desselben Tumors. Für zusätzliche Genauigkeit werden zwei Regionen jedes Tumors unabhängig voneinander untersucht, um die Übereinstimmung des klonalen Status sicherzustellen. Tumoren, bei denen der Klonalitätsruf der beiden Proben innerhalb des Tumors nicht übereinstimmt, werden als solche erfasst, und die Forscher führen Sensitivitätsanalysen für relevante Zwecke durch, um diesen Proben den einen oder anderen klonalen Zustand zuzuordnen.

Darüber hinaus werden die Forscher einen sekundären Assay (Cytoscan HD-Array, ThermoFisher) einsetzen, um die DNA-Kopienzahlvariation (CNV) in einem zufälligen Satz von Proben aus 58 Fällen von polyklonalem X und 49 Fällen von monoklonalem X zu bewerten (schätzungsweise 107 Gesamttests). Veröffentlichte und unveröffentlichte Daten haben gezeigt, dass CNV mit beträchtlicher Häufigkeit bei Nebenschilddrüsentumoren, einschließlich Adenomen, auftritt. Die CNV-Bewertung kann eine unabhängige Überprüfung eines auf X-Inaktivierung basierenden Befundes der Polyklonalität ermöglichen, indem heterogene CNV innerhalb einer Tumorprobe identifiziert werden, die auf Polyklonalität hinweisen, oder einheitlichere CNV, die Monoklonalität widerspiegeln. Fälle mit abweichenden Ergebnissen (geschätzt <10 %) aus HUMARA- und CNV-Assays werden im Rahmen der Explorationsziele umfassend untersucht.

Nicht identifizierte pathologische Daten, einschließlich der Anzahl und des Gewichts der den Teilnehmern entnommenen abnormalen Drüsen, werden an lokalen Studienorten aufgezeichnet und in eine an der WU verwaltete REDCap-Datenbank eingegeben. Anschließend werden die Ermittler die operativen und pathologischen Berichte auf Korrelation zwischen der Tumorklonalität und dem Vorliegen einer Einzeldrüsenneoplasie (SGN) oder einer Mehrfachdrüsenneoplasie (MGN) überprüfen. In Fällen von MGN führen die Forscher bei allen resezierten Tumoren eine ms-PCR von HUMARA-Allelen durch, um die Übereinstimmung der Klonalität zu beurteilen. Die Forscher werden auch die Auswirkungen zweier gängiger chirurgischer Ansätze auf die Ergebnisse bei Tumoren mit unterschiedlichem klonalen Status bestimmen. Die Häufigkeit von MGN, stratifiziert nach Tumorklonalität, wird bei Teilnehmern untersucht, die sich einer UNE mit ioPTH-Überwachung unterziehen, und BNE verglichen. Operations- und Pathologieberichte werden überprüft und die ioPTH-Werte werden vor und nach 5 und 10 Minuten ermittelt (PTH T1/2 = 5 Min.). nach Tumorentfernung. Die zugrunde liegende Tumorklonalität wird wie oben beschrieben bestimmt und mit den pathologischen Ergebnissen (MGN versus SGN) sowie der ioPTH-Kinetik (prozentualer Rückgang der PTH-Werte vor der Operation 5 und 10 Minuten nach der endgültigen Tumorentfernung) verglichen.

Um die Beziehung zwischen dem klonalen Status des Nebenschilddrüsentumors und den biochemischen Ergebnissen nach PTX für PHPT zu definieren, vergleichen die Forscher die klinischen Ausgangsmerkmale, chirurgischen/pathologischen Befunde und postoperativen biochemischen Ergebnisse nach PTX mit dem klonalen Status des Tumors in einer großen, multizentrischen Kohorte von Teilnehmern mit PTX. Bei insgesamt 645 Teilnehmern mit bekanntem Tumorklonstatus werden standardmäßige klinische und biochemische Daten (Serumkalzium, Albumin, intaktes PTH, 25(OH)D und Kreatinin) zu Studienbeginn (vor PTX) sowie nach 2 Wochen und 3 Monaten aufgezeichnet und 6 Monate nach der PTX (nicht alle Laborwerte werden zu jedem Nachuntersuchungszeitpunkt aufgezeichnet). Die Forscher vergleichen die Häufigkeit von erhöhtem PTH (ePTH) zu jedem Zeitpunkt bei Teilnehmern mit monoklonalen X- und polyklonalen X-Tumoren. Die Forscher haben zuvor gezeigt, dass der Vitamin-D-Status das ePTH nach PTX beeinflusst. Um den abnormalen Vitamin-D-Metabolismus zu untersuchen, den häufigsten Mechanismus des sekundären Hyperparathyreoidismus als Ursache der polyklonalen X-Erkrankung, werden die Forscher außerdem eine umfassende Analyse des Vitamin-D-Status bei einer Untergruppe von 111 WUSM-Teilnehmern mit monoklonalem X und polyklonalem X durchführen Tumoren. Unsere Analyse umfasst biochemische Indizes des Vitamin-D-Stoffwechsels (25-Hydroxyvitamin-D-, 1,25-Dihydroxyvitamin-D- und Vitamin-D-bindende Proteinspiegel).