Detección de células tumorales circulantes (CTC) en pacientes con cáncer de hígado sometidos a criocirugía combinada con tratamiento con DC-CIK

1 día antes y 2 días después de la criocirugía con o sin tratamiento con DC-CIK, se extrajeron aproximadamente 17 ml de sangre con ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) mediante punción venosa de pacientes con cáncer de hígado y voluntarios sanos. La sangre de los voluntarios sanos se utilizará para evaluar la sensibilidad y especificidad y como células de control negativo. Para evitar la contaminación con células de la piel, se descartarán 2 ml de sangre antes de tomar las muestras del estudio. Brevemente, las células mononucleadas se separarán de la sangre sobre Ficoll-Paque durante 20 min con 1800 g a 4 ℃. Las células de la interfaz se eliminarán y lavarán, y los glóbulos rojos (RBC) se eliminarán utilizando un tampón de lisis seguido de un lavado repetido. Las células mononucleares se contarán y se alícuotarán para RT-PCR y citometría de flujo multiparamétrica sobre la base de al menos 2-3×106 células para cada metodología. El sedimento celular se resuspenderá en solución salina tamponada con fosfato para citometría de flujo multiparamétrica y en reactivo Trizol para RT-PCR. Objetivo: La identificación de CTC puede conducir a un mejor diagnóstico y pronóstico y podría ayudar a elegir una terapia adecuada.