Der Nachweis zirkulierender Tumorzellen (CTCs) bei Patienten mit Leberkrebs, die sich einer Kryochirurgie in Kombination mit einer DC-CIK-Behandlung unterziehen

1 Tag vor und 2 Tage nach der Kryochirurgie mit oder ohne DC-CIK-Behandlung wurden Patienten mit Leberkrebs und gesunden Freiwilligen etwa 17 ml Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA)-Blut durch Venenpunktion entnommen. Das Blut der gesunden Freiwilligen wird zur Beurteilung der Sensitivität und Spezifität sowie als negative Kontrollzellen verwendet. Um eine Kontamination mit Hautzellen zu vermeiden, werden 2 ml Blut verworfen, bevor die Studienproben entnommen werden. Die einkernigen Zellen werden kurzzeitig über Ficoll-Paque für 20 Minuten mit 1800 g bei 4 °C vom Blut getrennt. Die Grenzflächenzellen werden entfernt und gewaschen, und die roten Blutkörperchen (RBCs) werden mithilfe eines Lysepuffers entfernt, gefolgt von einem wiederholten Waschen. Die mononukleären Zellen werden gezählt und für RT-PCR und Multiparameter-Durchflusszytometrie auf der Grundlage von mindestens 2-3×106 Zellen für jede Methode aliquotiert. Das Zellpellet wird in phosphatgepufferter Kochsalzlösung für die Multiparameter-Durchflusszytometrie und in Trizol-Reagenz für die RT-PCR resuspendiert. Ziel: Die Identifizierung von CTCs kann zu einer besseren Diagnose und Prognose führen und könnte bei der Auswahl einer geeigneten Therapie helfen.